血红素加氧酶-1基因转染在大鼠脑缺血再灌注损伤中的影响.pdfVIP

』b、≮t 血红素加氧酶．1基因转染在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用 摘 要 目的：观察腺病毒介导的血红素加氧酶-1(heme 基因转染在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用；探讨调节血红素加氧酶基因 表达对临床脑卒中的治疗前景。方法：建立携带血红素加氧酶．1基因的腺 因；采用AdEasy (Ad．HO．1 PFU／ml、2．0x1011 对照组(shamgroup，srI)、生理盐水组(vehiclegroup，V)、空载体组 (adenovirus group，Ad)和Ad—HO-1转染组(HOgroup)，各组18只。后3 组在缺血前3d于大鼠右侧脑室分别注射20山生理盐水、20山生理盐水含 x 1010 空载体腺病毒(1．0 Plaque．forming x 毒(1．01010PFU／m1)1 cerebral 脉闭塞(middle artery 2％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，术中麻醉机控制持续吸入2％异氟烷，用线 栓阻断右侧MCA的血液供应，阻断大脑中动脉2h后退出线栓，给予再灌注。 术中以手术恒温设备将直肠温度控制在36．537．5℃，以探针监测大鼠颞 温，多普勒探针检测脑缺血局部血流。每组大鼠在缺血再灌注后24小时测 定Garcia神经功能评分，然后处死大鼠并取全脑标本，行脑切片采用TTC 染色法测定大脑梗死体积，并计算梗死体积百分比。于脑缺血再灌注2h 片行TUNEL染色检测细胞凋亡率。在荧光显微镜下观察连续转染后24h 时脑组织荧光蛋白的表达情况，并计算转染率。Westernblot检测转染后 Westernblot 24h脑组织HO．1的表达。结果：转染后HO．1表达的变化： 较HO．1表达无明显差异。绿色荧光蛋白示转染率：显微镜下观察Ad组和 HO组的大鼠脑切片，均可见有绿色荧光蛋白表达且两组比较绿色荧光蛋 白表达量无明显差异，并测定转染率为(34．5士3．4)％。神经功能评分：在脑 9．5714-0．254、9．8574-0．149、12．754-0．21 l，HO组大鼠神经功能评分均显著 功能评分无明显差异。梗死体积及细胞凋亡的检测：a．脑梗死体积：在脑 1．80士7．544％、27．314-2．91 为O％、60．364-6．750％、6 3％，与SH组比较，V 组、Ad组脑梗死体积百分比显著增高；与V组及Ad组比较，HO组脑梗 死体积百分比显著降低俨O．01)；Ad组与V组比较脑梗死体积百分比无 组中纹状体、海马(CAl区)、皮层(缺血半暗带)的凋亡细胞阳性率及 O．1％／0．6744-0．1860 亡率及Caspase一3活性均无明显差异。结论：通过AdEasySytem成功构建 模型；腺病毒携带的HO．1基因通过立体定向法脑室内转染能有效的转染 脑组织，并在脑内稳定表达；Ad．HO．1对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织 有保护作用，其机制是外源性HO．1基因促使HO．1表达上调，高度表达的 减少梗死的作用。 关键词：血红素加氧酶．1；脑缺血；转染；腺病毒 Protectiveeffectsofheme transfection oxygenase一1gene oncerebralischemia inrats reperfusioninjury observetheeffectsoncerebralischemia- Abstract：bjective：To aftertransfectionofheme inratfor reperfusion(CIR)injury oxy