调节软骨细胞骨架蛋白对成软骨表型的作用.pdf

摘 要 目的通过调节软骨细胞骨架蛋白结构，分析软骨细胞成软骨细 胞表型是否发生改变，探讨软骨细胞骨架蛋白结构改变与成软骨细胞 表型改变的关系。 方法体外分离、二维培养新西兰兔软骨细胞，待细胞达到一定 数量后，采用三维微团培养法培养软骨细胞2周，随机将软骨细胞分 为对照组、秋水仙碱组、细胞松弛素B组及丙烯酰胺组，通过加入秋 水仙碱、细胞松弛素B及丙烯酰胺分别调节软骨细胞骨架的微管、肌 动蛋白微丝及波形蛋白中间纤丝，继续培养1周、3周，从大体形态、 组织切片HE染色、阿尔新蓝染色、免疫组化染色分析成软骨细胞表 型的改变。 结果1．软骨细胞行三维微团培养2周后，可形成肉眼明显可见 的细胞微团组织，呈扁椭圆形，色白，质软，弹性可； 2．不同药物处理1周，质量上发现对照组与秋水仙碱组、细胞 素B组及丙烯酰胺组在质量上无明显差异(8．8444+0．7012， 3．HE染色显示，不同药物处理1周时，对照组、秋水仙碱组及 细胞松弛素B组细胞较密集、均一，丙烯酰胺组细胞较少、分散；3 万方数据 周时，对照组与秋水仙碱组、细胞松弛素B组及丙烯酰胺组软骨细胞 形成类软骨陷窝现象，细胞分布均一； 4．阿尔新蓝染色发现，不同药物处理1周时，对照组与秋水仙碱 组、细胞松弛素B组相比糖胺聚糖表达较多，各组无明显差异 3周时，对照组、秋水仙碱组、细胞松弛素B组及丙烯酰胺组糖胺聚 糖均为高表达， 5．免疫组化染色显示，药物处理l周时，对照组与秋水仙碱组、 细胞松弛素B组相比COL 0．0829_+0．0066)表达多，COL 组相比COL I 时，对照组、秋水仙碱组、细胞松弛素B组及丙烯酰胺组COLII 772_+0．0353) 表达多，COL 0．0746_+0．0135)表达少，各组间无明显差异(PO．05)。 结论1．微管、肌动蛋白微丝发生变化，不影响正常软骨细胞特 异性表型糖胺聚糖、COLII继发改变。 2．波形蛋白中间纤丝发生变化，短期内出现软骨细胞特异性表型 万方数据 糖胺聚糖、COLII表达下降，纤维化软骨细胞特异性表型COLI表达 增多；但延长作用时间而不增加作用强度时，则不影响正常软骨细胞 特异性表型糖胺聚糖、COLII继发改变。 关键词软骨细胞；细胞骨架；微团培养；软骨表型；骨关节炎 万方数据 Abstract aimedto theassociationbetweenthe objective：Weexplore changes of the chondrocytecytoskeleton(CSK)andphenotypebymodulating CSK structureand thealterationof chondrocyteprotein measuring chondrocytechondrogenicphenotype． fromkneeointsofNewZealandRabbits Methods：Chondrocytesj wereculturedas3D for14 afterisolationandinvitro days