专题1基因工程_附件.pptVIP

基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 1.1 DNA重组技术的基本工具 准确切割DNA的工具（“分子手术刀”） ——限制性内切酶 DNA片段的连接工具（“分子缝合针”） ——DNA连接酶 基因转移工具（“分子运输车”） ——载体 原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵，但是，在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，以保证自身的安全。 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 限制性内切酶 黏性末端和平末端 DNA连接酶——“分子缝合针” DNA连接酶有两种：一种是从大肠杆菌中分离得到的，称之为E·coliDNA连接酶。另一种是从T4噬菌体中分离得到，称为T4DNA连接酶。 相同点：都是连接被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 E·coliDNA连接酶只能连接黏性末端； T4DNA连接酶既可“缝合”黏性末端，又可“缝合”平末端。 DNA连接酶——“分子缝合针” DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？ 基因的载体——“分子运输车” 质粒 2和7能连接形成…ACGT… ????????????? …TGCA…； 4和8能连接形成…GAATTC… ???????????? …CTTAAG…； 3和6能连接形成…GCGC… ???????????? …CGCG…； 1和5能连接形成…CTGCAG… ???????????? …GACGTC…。 * 专题1 基因工程 结果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程的别名 体外 基因 DNA分子水平 基因拼接技术或DNA重组技术 剪切→拼接→导入→表达 获得人类需要的基因产物 　　基因的大小以纳米计算，要对它进行剪切、拼接等操作，没有非常精细的工具是不行的。进行基因操作最少需要以下三种工具： 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 分布：主要在原核生物中 作用特点：特异性，即识别特定核苷酸序列，切割特定位点 (举例：EcoRI限制酶能特异性识别GAATTC序列，并在G和A之间切开) 作用位点：磷酸二酯键 限制酶 含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别序列，或者通过甲基化作用使限制酶不能将其切开。 思考：含有某种限制酶的细胞，会不会切割自身的DNA 呢？ 不是一回事。 相同点：形成磷酸二酯键。 但是：1）DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 2） DNA聚合酶需要以DNA单链为模板；而DNA连接酶不需要模板。 载体必须具备的条件： 1、对受体细胞无害并能够在宿主细胞中复制并稳定地保存； 2、具有一个到多个限制酶切点，以便与外源基因连接； 3、具有某些标记基因，便于进行筛选。（如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等 ） 载体的作用： 1、将外源基因转移到受体细胞中去。 2、利用载体在受体细胞内复制，获得大量的外源基因。 常用的载体有： 质粒，λ噬菌体的衍生物，动植物病毒等 质粒是基因工程最常用的运载体，是一种裸露的，结构简单，独立于细菌拟核DNA之外，能够自主复制的很小的环状DNA分子，大小大约只有普通细菌拟核DNA的百分之一。 要对天然质粒进行人工改造 课堂作业：请动手完成课后的模拟制作； 教材P7思考与探究 1