磷钨酸-镁法测定HDL-C.pptVIP

实验三 磷钨酸－镁沉淀法测定高密度脂蛋白-胆固醇(酶法试剂盒) 临床生物化学实验室 一、实验目的 掌握：磷钨酸－镁沉淀法测定HDL-C的基本原理。 熟悉：试剂盒法测定HDL-C的基本操作。 了解：HDL-C测定的注意事项及其临床意义。 二、实验原理　 用大分子多阴离子化合物（磷钨酸盐）与两价阳离子（镁离子）沉淀血清中的LDL、VLDL和Lp(a)后，上清液中只含有HDL。 然后用酶法测定上清液中的胆固醇含量。先用胆固醇酯酶将其转变为游离胆固醇，再在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成△4-胆甾烯酮和过氧化氢，H2O2在4-氨基安替比啉和酚或3-乙基-N-(3-磺丙基）-3-甲基苯胺（ESPAS）作用下，经过氧化物酶催化，反应生成红色的醌亚胺染料，其颜色深浅与标本中的胆固醇含量成正比。 胆固醇酯酶 三、试剂 1. 沉淀剂 磷钨酸-镁试剂 2．胆固醇酶试剂： GOOD′s缓冲液（pH6.7） 50mmol/L 胆固醇酯酶 ＞200u/L 胆固醇氧化酶 ≥100u/L 过氧化物酶 ≥3000u/L 4-AAP 0.3mmol/L 苯酚