第四章微生物育种.ppt

（3）双倍体的检出 检出双倍体的方法有三种： l）用扩大镜观察异核体菌落的表面，如果发现有野生型颜色的斑点与扇面，即可用接种针将其孢子挑出，进行分离纯化，即得杂合双倍体。 2）将异核体菌丝打碎，于基本培养基和完全培养基平板上进行分离，经培养挑出异核菌落。在个别异核菌落上长出野生型原养性的斑点和扇面，将其挑出进行分离纯化即可。 上述两种方法只能从每个异核体菌落（丛）上挑取一个斑点或扇面，以排除无性繁殖的干扰。 3）将大量异核体孢子分离于基本培养基平板上从中长出野生型原养性菌落，将其挑出分离纯化，即得杂合双倍体。 （4）分离子的检出 1）将杂合双倍体单孢子分离于完全培养基平板上，培养至菌落成熟，从每个菌落挑出一个斑点或扇面的孢子于完全培养基斜面上，培养后经过纯化与鉴别即得分离子。 2）用选择性培养基筛选分离子 我国进行了不少霉菌杂交育种方面的工作。60年代青霉素产生菌产黄 准性生殖的过程： ①菌丝联结 ②异核体形成（质配） ③核配形成杂合二倍体 ④体细胞交换与单倍体化。 准性生殖与有性生殖的比较 项 目 准性生殖 有性生殖 参与接合的亲本细胞 形态相同的体细胞 形态或生理上有分化的性细胞 独立生活的异核体阶段 有 无 接合后双倍体细胞形态 与单倍体基本相同 与单倍体明显不同 双倍体变单倍体的途径 通过有丝分裂 通过减数分裂 接合发生的几率 偶然发现，几率低 正常出现，几率高 * 单倍化：将两个不同性状的亲本菌株分别接种到含醋酸钠等产孢子培养基斜面上，使其产生子囊，经过减数分裂后，在每个子囊内会形成4个子囊孢子（单倍体）。用蒸馏水洗下子囊，经机械法（加硅藻土和石蜡油，在匀浆管中研磨）或酶法（用蜗牛酶等处理）破坏子囊，再经离心，然后将获得的子囊孢子涂布平板，就可以得到由单倍体细胞组成的菌落。 杂交：将两个亲本的不同性别的单倍体细胞混合离心使之密集接触以增加有性杂交后代的可能性。 杂交后代的检出：这种双倍体细胞与单倍体细胞有明显的差别，易于识别。 筛选优良性状个体： * 菌丝联结（anastomosis） 形成异核体（质配）（heterocaryon） 核融合（nuclear fusion）或核配（carryogamy） 体细胞交换（somatic crossing-over）和单倍体化 准性生殖过程： ①菌丝联结 ②形成异核体 一个菌株的细胞核进入到另一菌株的细胞中，不同遗传性状的核在同一细胞质中生长。 ③核配形成杂合二倍体 特点：频率低，10-5～10-7。 ④体细胞交换和单倍体化。 B 放线菌的杂交技术 现在常用的放线菌杂交方法主要有三种，即混合培养法、平板杂交法与玻璃纸转移法。 a 混合培养法 （1）选择性平板法 所使用的两亲株必须是互补的营养缺陷型。将用来进行重组的两亲株混合，接种到丰富的完全培养基斜面上，孢子形成后制成单孢子悬浮液，然后在选择性培养基平板上进行分离，长出的菌落即为各种类型的重组体。 （2）异核系分析法 将混合培养后所制得的单孢子悬浮液，分离在基本培养基平板上，其中长成的小而丰富的菌落即为异核系。然后将异核系再分离在完全培养基上，长出的菌落即为分离子。 b 平板杂交法 该方法是先将菌落培养在非选择培养基上，当菌落形成孢子以后，用影印培养法将菌落印至已铺有试验菌孢子的完全培养基平板上，再培养至孢子形成。然后把这上面的孢子影印到一系列选择性培养基上，以便于各种重组体子代的生长。 c 玻璃纸转移法 使用本法必须具备两个条件： 第一，直接亲本必须带有两个遗传标记，即一个直接亲本带有一种营养要求与抗药性（如抗链霉素）；而另一个直接亲本则为对该药物敏感（如对链霉素敏感）和带有另一种营养缺陷型。 第二，选择性培养基是带有抗性药物的补充培养基。 该方法是在选择性培养基上挑选异核系菌落，其原理是：异核体带有链霉素敏感的等位基因，在含有链霉素的选择性培养基上不能生长。敏感性亲本与抗药性亲本因为营养要求得不到满足也不能在该选择性培养基上生长。而不带链霉素敏感等位基因的两直接亲本的局部结合子则能在该选择性培养基上生长、繁殖成为异核系菌丛。 放线菌的杂交育种 基因重组过程近似细菌，育种方法与霉菌相似． 放线菌的遗传体系与杂交原理： 异核现象：同一细胞（菌丝）含不同基因型的核。无