沙地云杉胚性细胞悬浮培养的分析研究.pdfVIP

摘 要 本文以沙地云杉成熟合子胚为材料，诱导胚性愈伤组织，并继代培养，进而建立 分散性好、活力高的悬浮细胞系。为进行沙地云杉的原生质体培养、基因导入及细胞 融合等研究提供实验基础。 l沙地云杉成熟合子胚诱导的愈伤组织类型有胚性与非胚性愈伤两种。质地松 软，表面有光泽的愈伤为胚性愈伤，其余为非胚性愈伤。愈伤组织的诱导率比较高， 大部分诱导率在60％以上，但没有添加激素的培养基上不产生愈伤。在2mg／L6-BA 和lmg／L2，4．D的浓度配比下，达到最高诱导率，为93．75％。所有胚性愈伤组织在保 持和增殖时出现了褐化现象，但是程度不一样：在不加任何激素时，愈伤组织褐化率 附加时比单个附加时的愈伤组织褐化率小。同样，2，4．D浓度在0．1mg／L和0．2mg／L 时愈伤组织胚性保持的好，6-BA和2，4．D一起附加时比单个附加时的愈伤组织胚性 保持的好。 2沙地云杉胚性细胞悬浮培养生长周期为12d，通过选择，最佳培养条件是： 110r／min，25士1℃、黑暗条件下震荡培养。 3动力学研究过程中，细胞鲜重和干重的变化趋势是一致的，延迟期为第0一-3d： 对数生长期为4--8d；从第9d开始进入稳定期。细胞活力的OD值第4d时达到最大， 为O．74；随后开始下降，到第10d时降到最小，为0．34：之后又有所回升。由细胞活 力和干重变化曲线得出，继代周期为6～-8d。在生长周期内，pH值一直在减小，第1～ 9d减小幅度比10--一12d间要大。Ⅻ山+在培养过程中消耗最快，在第10d时已耗尽； 总糖的消耗量在3-8d下降最快，N03‘和P043‘的消耗趋势与蔗糖的基本相同，只是 进入稳定期。 4细胞活力与其它各参数之间在0．05和0．01检验水平下都不相关；而其余的各 参数之间在O．Ol检验水平下都显著相关。细胞干重与其余的各参数之间的都呈负相 关。除了细胞活力OD值外，其余个参数与细胞干重的相关系数都在一O．95以上。因 此，培养液中不仅是总糖和其它营养元素直接影响细胞的增殖，培养液酸碱性也直接 影响细胞的增殖。 关键词：沙地云杉；成熟合子胚；胚性愈伤组织；细胞悬浮培养；动力学 Researchof Cells CultureonPicea EmbryogenicSuspension Mongolica Abstract Inthis materials of wasthemature Picea paper，the embryos zygotic mongolica， and a anda induced callus established embryogenicsubculture，whichgooddispersion cell an basis line．nat forthe llighdynamicsuspension providedexperimental protoplast cell on transferand fusion andso ofPicea culture，gene study mongolica． 1．Thereweretwo callusofPicea callusand