阿托伐他汀对对比剂肾病大鼠肾脏细胞凋亡及FAS-FASL表达影响.docVIP

阿托伐他汀对对比剂肾病大鼠肾脏细胞凋亡及FAS/FASL表达影响[摘要] 目的 研究阿托伐他汀对对比剂肾病大鼠肾脏细胞凋亡及FAS/FASL表达的影响。 方法 清洁级雄性SD大鼠32只随机分为A（正常组）、B（实验对照组）、C（造模组）、D（他汀组）4组，每组8只。他汀组于造模前3 d至造模后3 d给予阿托伐他汀30 mg/（kg·d）灌胃，其余组给予等体积的生理盐水灌胃。建立对比剂肾病大鼠模型，其中C、D组注射吲哚美辛、N—硝基—L—精氨酸甲酯、泛影葡胺，B组以生理盐水代替泛影葡胺，A组只注射等体积的生理盐水。采集各组大鼠造模前、造模后48 h的血液，用全自动生化分析仪检测血肌酐（SCr）值；造模72 h后处死大鼠摘取右肾，采用原位末端标记法（TUNEL）检测肾脏细胞凋亡情况；免疫组化法检测肾脏FAS、FASL表达变化。 结果 ①C组造模前血SCr较造模后升高25%（P 25%，且造模后C组血SCr较各组有所升高（P 0.05）。 2.2 TUNEL结果 光镜下，造模组较A、B两组肾脏凋亡细胞数明显增多，阳性细胞百分率增高（P 0.05），D组（他汀组）较C组（造模组）凋亡细胞数减少，阳性细胞百分率减少（P 0.05）。 2.3 免疫组化结果 C组（造模组）较A、B两组肾脏FAS及FASL的表达显著增强（P 0.05），D组（他汀组）较C组（造模组）肾脏FAS和FASL的表达减弱（P 0.05）。 3 讨论 CIN指使用对比剂48 h内发生的无其他原因可解释的急性肾功能损害性疾病，通常以血清肌酐上升超过44.2 μmol/L（即0.5 mg/dL）或较造影前的基础水平升高超过25%为诊断标准[5，6]。本研究中，大鼠血液采集的时间点为造模后48 h，结果示造模组血SCr较造模前水平升高（P 0.05），且上升幅度均大于造模前25%，符合上述诊断标准。 对比剂肾病的发病机制尚未明确，高浓缩的对比剂不仅能直接损伤肾小管（对比剂使肾小管上皮细胞Ca2+内流增加，胞浆内Ca2+浓度增高，细胞骨架破坏），诱导细胞凋亡，而且CIN发病过程中产生的氧自由基、炎症因子等也参与了细胞凋亡[8]。尤其是肾脏缺血、缺氧时，凋亡更易发生。Yano等[9]研究发现，对比剂可导致促凋亡基因Bax mRNA表达升高，抑凋亡基因bcl2 mRNA表达下降而促进细胞凋亡。本实验中C组（造模组）肾脏凋亡细胞数明显比其他三组增多（P 0.05），也证明了凋亡确实存在于CIN中。 细胞凋亡受多种因素调控，受体介导凋亡途径中，FAS/FASL系统最具代表性。FAS及 FASL是诱发肾脏多种细胞发生凋亡的蛋白。FASL属于TNF（肿瘤坏死因子）细胞因子超家族，FAS属于细胞膜受体中的一员，FAS和FASL结合，在细胞毒性T细胞（CTL）介导的细胞毒作用和细胞凋亡中起重要作用，CTL激活后诱导自身表达FASL，并与靶细胞表面FAS结合，触发靶细胞的死亡信号，引发DNA断裂，发生凋亡。以往认为，FASL只存在于免疫系统淋巴细胞表面，但在肾组织也存在CTL表面的FASL与靶细胞的FAS结合，对小球小管和间质细胞产生细胞毒作用。本研究中，C组（造模组）肾脏FAS、FASL的表达明显比其他三组增强（P 0.05），说明FAS/FASL系统在CIN中的表达被广泛激活。 　　他汀类药物目前预防CIN的机制尚未明确，但他汀类药物调节细胞增殖/凋亡平衡的作用得到肯定，特别对于高血压肾病、糖尿病肾病等系膜增殖性肾病，长期应用他汀类药物可以抑制系膜细胞的增殖、促进凋亡[14]。但这种作用与他汀类药物的作用时间、剂量、药物种类、不同病理损伤有关。他汀类药物在慢性肾脏病上表现的是促进凋亡，但在CIN这种急性肾损伤中，短期大量用药是否对肾脏细胞起抗凋亡作用是本实验要研究的。本研究中，D组（他汀组）肾脏细胞凋亡数较造模组有所下降（P 0.05），血SCr的含量及FAS/FASL的表达也明显减弱（P 0.05），说明阿托伐他汀对肾脏起保护作用，减少了CIN的发生，并且这种保护作用和细胞凋亡的减少有关。 虽然本研究存在一定的局限性，如样本数量较少、不能排除其他混杂因素的影响等，但本实验仍能表明，阿托伐他汀可以预防CIN的发生，并且减少细胞凋亡，其具体的机制需要用更多的样本和其他技术去继续探讨。 [参考文献] [1] Giuseppe P，Annunziata N，Massimo C，et al. Usefulness of statin pretreatment to prevent contrast—induced nephropathy and to improve long—term outcome in patients und