桃红四物汤含药血清对VSMC迁移和β3整合素、MMP9和FAK%2fP38MAPK信号表达影响.pdfVIP

本研究采用桃红四物汤含药大鼠血清对体外培养的大鼠VSMC进行干预，观 察干预对VSMC迁移及β3整合素、MMP和FAK/P38MAPK信号表达的影响，探讨 含桃红四物汤血清防治PTA及支架安置术后再狭窄过程中，上述因素所起的作用 及其相关机理。 10 材料和方法 1.实验动物： 成年SD大鼠50只，体重350~450g，均由南华大学实验动物部提供。 2. 实验材料： 2.1 主要试剂： DMEM/F12 干粉培养基 Gibco 公司 胰蛋白酶 Sigma 公司 胎牛血清 杭州四季青生物工程材料有限公司 小鼠抗α-SM-actin单克隆抗体 武汉博士德生物工程有限公司 兔抗大鼠β3整合素多克隆抗体 天津灏洋生物制品科技有限责任公司 兔抗大鼠FAK多克隆抗体 天津灏洋生物制品科技有限责任公司 兔抗大鼠MMP9 多克隆抗体 武汉博士德生物工程有限公司 兔抗P38MAPK 多克隆抗体 美国Santa Cruz 公司 兔抗大鼠β-actin 多克隆抗体 北京博奥森生物技术有限公司 SABC 免疫组化试剂盒 武汉博士德生物工程有限公司 DAB 显色试剂盒 武汉博士德生物工程有限公司 Western 印迹化学发光试剂 美国Santa Cruz 公司 显影定影试剂盒 碧云天生物技术研究所 2.2 主要仪器设备： 医用净化工作台 苏州泰安空气技术有限公司，SW-CU-2Fb型 C02细胞培养箱 美国Harris公司，300/3000型 Boyden迁移小室 江苏海门麒麟医用仪器厂 水平电泳槽 北京市六一仪器厂，DYY-III型 垂直电泳仪器及转膜系统 北京市六一仪器厂 倒置显微镜 日本OLYMPUS公司 电子天平 北京赛多利斯天平有限公司 Alphalmage TM22000型计算机 美国Alpha Innotech公司 凝胶成像分析系统 恒温水浴摇床 湘仪离心机仪器有限公司，SHY型 11 台式高速离心机 上海医用分析仪器厂，TGL-16G(B)型 高压蒸汽消毒锅 日本TOMY公司，SS-325型 去离子水制备机 ELGM公司 微量移液器(10µl,100µl,1000µl) 德国Eppendof公司 恒温水浴箱 英国Grant公司 2.3 主要溶液配制： PBS缓冲液：取NaCl 8.0g 、KCl 0.2g 、Na HPO ·7H O 3.48g、KH PO 0.2g ， 2 4 2 2 4 溶于800ml三蒸水中，震荡至充分溶解，补加三蒸水至1000ml； 4%多聚甲醛缓冲溶液：取NaCl 8.0g 、KCl 0.2g 、Na HPO ·7H O 3.48g、KH PO 2 4 2 2 4 0.2g及多聚甲醛粉末40