西米特酸抑制PI3K%2fAKT信号通路和诱导肿瘤细胞程序性死亡（PCD）地.pdfVIP

|lt『米特酸抑制P13K／AKT信号通路及诱导肿瘤细胞W序性死亡的研究 中文摘要 necrosisfactor 31是一种 TNFAIP3(tumoralpha—inducedprotein 锌指结构蛋白，它通过干扰RIP(receptorinteractingprotein)或 factor 21介导的转移活化刺激信号 TRAF2(TNFreceptor．associated 途径抑制TNF介导NF-kB依赖的基因表达，并抑制TNF介导的细 处理HL．60细胞后发生了改变，然而，Westernblot结果提示， TNFAIP3表达水平并无改变，表明其不参与西米特酸诱导HL一60细 胞凋亡的过程。 凋亡过程中起重要的调节作用。Bcl．2蛋白是bci．2家族中抑制凋亡 的蛋白，Bax蛋白是bcl．2家族中促进细胞凋亡的蛋白。Bcl一2家 族蛋白常以形成同源或者异源二聚体发挥功能。Bcl．2和bax在体 内通过形成异源二聚体而发挥作用。Bcl．2表达高时，与Bax形成 异源二聚体抑制细胞凋亡；Bax表达高时，形成自身同源二聚体， 促进细胞凋亡。我们的研究显示，西米特酸处理HL．60细胞后Bcl-2 和Bax蛋白均无明显改变，表明Bcl．2和Bax不参与西米特酸诱导 HL．60细胞凋亡的过程。 PKC8是一种丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，近年来认为PKC8参与 了凋亡的发生发展过程。有研究表明，PKC5与酪氨酸蛋白激酶c．abl 以及p73的功能相关。PKC5激活方式有三种：转位、磷酸化、蛋 blot法检 段，进而剪切caspase．3，诱导细胞凋亡。我们用Western 测了西米特酸处理HL．60细胞后PKC5的改变，如图15显示，在 西米特酸处理HL．60细胞的早期，PKc6即产生了断裂片段。我们 进一步用PKC8特异性抑制剂rottlerin，Westernblot观察到可抑制 断裂片段的产生，但不能阻止西米特酸诱导HL．60细胞的凋亡。 二、西米特酸诱导Hep3B细胞发生自噬性死亡的研究 1．西米特酸对Hep3B细胞的生长抑制作用 首先，我们用MTT法检测了西米特酸对Hep3B细胞增殖的影 Vl 两米特酸抑制P13K／AKT信号通路及诱导肿瘤细胞程序性死亡的研究 中文摘要 23．3％、 72h，对Hep3B细胞的生长抑制率分别为10．4％、12．4％， 89．1％和96．6％，与对照组相比，该药能明显抑制Hep3B细胞的增 殖(PO．05)，并呈浓度依赖性，其IC；。为0．57 gg／mi。这说明西米 特酸在体外能显著抑制Hep3B细胞的增殖。 上文已证明西米特酸对Hep3B细胞有较强的抑制作用。但是 否可诱导Hep3B细胞凋亡尚不清楚。取对数生长期的Hep3B细胞， caspase．3和PARP蛋白并无明显改变，也无凋亡时典型的断裂带的 产生，表明，西米特酸诱导Hep3B死亡不是通过细胞凋亡方式实现， 可能是通过其他的细胞死亡方式。 3、西米特酸诱导Hep3B细胞发生自噬性死亡 3．1丫啶橙(Acridine orange)染色 上文已排除西米特酸诱导Hep3B细胞为非凋亡性死亡。 Aridine orange(A01是可以染色细胞内的酸性小体，如溶酶体等。细 胞发生自噬时，因溶酶体参与形成自噬溶酶体，致使pH值升高， 胞内的酸性小体减少，因此Ao染色可作为一种自噬的指示剂。我 表明，在西米特酸处理Hep3B细胞36h后，酸性小体(红色)比对 照组明显减少，细胞呈现圆形、胞浆淡绿色改变，表明溶酶体等酸 性小体减少、酸性被中和，提示自噬可能是谣米特酸诱导Hep3B细 胞死亡的方式。 3．2Monodansylca