吸烟对RhoE表达和定位影响和RhoE在非小细胞肺癌中预后价值.pdfVIP

6 第一部分RhoE在肺癌组织中的表达情况 前 言 尽管越来越多的研究表明RhoE在癌症的发生、发展和转移方面有重要的作 用，但是关于RhoE临床研究的资料却很少。到目前为止，仅在4例良性前列腺疾 病和5例恶性肿瘤的前列腺组织中用免疫组化检测了RhoE的表达情况，发现RhoE 在良性疾病的组织表达而在恶性前列腺癌中则表达水平明显下调“，而在其他人 类肿瘤组织中尚无相关报道，特别是这种表达水平改变的程度没有具体的统计数 据，当然更没有关于这种改变的临床意义的报道。 其次，当前的研究多是采用芯片进行大批量筛选的过程中发现RhoE的表达 改变很大，从而推论RhoE可能与肿瘤发生密切相关，因此多为间接性的数据。 比如人们在研究不同生育史的妇女乳腺上皮细胞中基因表达有无差异时偶然发 现RhoE在有生育史的妇女乳腺上皮细胞中表达水平比无生育史的妇女高9倍以 上，而无生育妇女乳腺的上皮细胞与有生育史的妇女乳腺上皮细胞相比，对化学 致癌物更敏感，无生育史的妇女更易于发生乳腺癌，由此人们分析RhoE表达水 平升高可能抑制肿瘤的发生13；动物实验也证明RhoE能够诱导小鼠乳腺肿瘤上皮 细胞问紧密连接的形成，而紧密连接的形成有助于防止肿瘤细胞转移，因此认为 RJloE可能参与肿瘤的发生发展和转移过程“。 mRNA的水平在外界 第三，多位研究者采用基因表达芯片证实细胞防1RhoE 条件刺激下会发生改变。如在怀孕中期的子宫肌层RboE的mRNA表达会上调”； 用非淄醇类抗炎药处理结肠癌细胞系，RhoEmRNA的表达也会增强16；而巨噬细 mRNA水平 胞抑制因子1(MIC．1)处理前列腺癌细胞系则出现相反的变化，RhoE 显著下降17；雌二醇处理前列腺基底细胞后，RhoEmRNA的表达先下调后上升随 时间延长则又下降埽。因此有专家提出RhoE表达的调控是在转录水平进行的，至 于有无基因组DNA的变化导致RhoE表达水平的改变却没有数据证实。 基于当前RhoE研究方面存在的问题以及对上述三方面问题的思考，本研究 病人的癌组织和远癌正常组织中RhoE在mRNA和蛋白水平的表达情况并且分析 了RhoE表达改变与临床病理参数之问的关系，然后采用基因组定量PCR和测序 分析方法鉴定影响RhoE表达的可能原因。 材料与方法 一． 实验材料 (一)组织标本 全部标本来自中国医学科学院肿瘤医院2003年9月到2004年2月闻外科手术 切除的原发性t1：4,细胞肺癌标本30例，包括16例腺癌和14例鳞癌，术前未接受放、 化疗或其他针对肿瘤的治疗，每例取材包括肺癌及距病灶5锄以上的相应远癌 正常肺组织各1份，又有相应的病理组织切片。病例的筛选标准如下：具有详细 的个人资料一病人姓名、年龄、性别、吸烟史、家族史等以及临床病理资料一 肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期、脉管瘤栓、胸膜侵犯等；术后每个样品均 经过病理学专家的确诊，并且所有选择的标本肿瘤细胞含量大于50％；所有样品 的分期按照WHO国际组织学分类标准进行；所有研究对象均无直系亲属关系。 标本取材在手术室内无菌操作，手术切下后5分钟内取材并迅速置于液氮冻存， 然后置．80℃冰箱保存。30例病人的l临床病理资料总结如表1。 (二)主要大型仪器 仪器名称 公司 产地 电子天平 SartorusBS210S 德国 电子天平 SartorusBL3100 德国 12 微量高速离心机EBA Hettich公司 德国 96孔PCR仪PTC200MJResearch