JS018菌OPD酶的纯化、特性的分析研究及其基因克隆的初步探讨.pdfVIP

JS018菌OPD酶的纯化、特性的分析研究及其基因克隆的初步探讨.pdf

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独创性声明 本人声明,所呈交的学位(毕业)论文,是本人在指导教师的指导下独立 完成的研究成果,并且是自己撰写的。尽我所知,除了文中作了标注和致谢中 已作了答谢的地方外,论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。与我一 同对本研究做出贡献的同志,都在论文中作了明确的说明并表示了谢意,如被 查有侵犯他人知识产权的行为,由本人承担应有的责任。 学位c㈨论文作者亲笔虢仰惭慨卅·f呷 论文使用授权的说明 本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位(毕业)论文的规定,即学 校有权送交论文的复印件,允许论文被查阅和借阅;学校可以公布论文的全部或 部分内容,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 保密,在 年后解密可适用本授权书。 口 不保密,本论文属于不保密。b/ 学位(毕业)论文作者亲笔签名:研积多 蹦、堋。多]1 艚溯艴獬:j瞰 日期.即,上,7 JSOl8茵OPD酶的纯化、特性研究及其基因克隆的初步探讨 摘要 有机磷农药的使用给环境带来了日益严重的污染问题,本实验室从三明农药 厂分离得到了一株高效降解有机磷农药的细菌(JS018),本研究对JS018菌的降 解酶进行纯化,以及对它的生物学特性进行研究,同时还初步探讨了降解酶的基 因克隆: 1、细菌JSOl8有机磷农药降解酶的纯化及同源性分析 细菌JS018有机磷农药降解酶经硫酸铵分级沉淀,SephadexG-100凝胶过 滤,及DEAE一52柱层析,获得的酶液经SDS—PAGE电泳为一条蛋白带,测得该酶 的分子量约为37Kda,同时表明纯化后的蛋白组分己达到电泳纯。对纯化后的甲 NP一334647的降解酶同源性仅为29%,可能为一种新的降解酶。 2、细菌JSOl8有机磷农药降解酶的特性研究及动力学分析 酶特性研究表明:酶作用的最适温度约为35C,在15。C~35。C酶较稳定; 最适pH约在8.5,在pH5.5~9之间较稳定:低浓度的甲醇可以提高甲基1605 降解酶的活性。 mmol EDTA浓度小于1 L“时,对酶活没有影响或影响很小,当EDTA浓度大 于1mmol L’1时,会抑制酶活性,抑制作用随着浓度的增加而加强,当EDTA浓 mmol 度达到25 mmol U1时,几乎完全抑制酶的活性。l L~Tween一20和Tween一80 mmol 会抑制酶活性,抑制率分别为21.6%和16.1%。1L1浓度的Fe”和Ca“有促 进酶活作用,分别提高酶活28%和14.1%;l mmolL1K+、 Co”、Li+、Na+和 Mg”对酶活没有什么影响;lrrcmi L’!浓度的Ba”、Fe”、Af、Ar、Cu”、SDS、 Hg”和cu2+会强烈地抑制酶活性。金属离子对酶有影响,推测该酶可能为金属酶。 用甲基1605作底物,测得I(111为63.559um01.L~,Vmax为14.124u m01.min~。 通过以上实验可以看出,JS018菌OPD酶有可能是一种新的有机磷农药降解 酶,丰富了有机磷农药降解酶的理论知识:同时,这种OPD酶是一种相对广谱的 降解酶,具有很强的实际利用价值。 关键词:OPD酶:jSOl8菌:酶的纯化:酶特性 JS018苗0PD酶的纯化、特一t生-N-g.其基因克隆的初步探讨 .2. Abstract of fromstrainJS018andits clone The degradingenzyme gene purification,characteristics

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