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cyclinD1、P16、P27联合判断癌症患者病情探究 　作者：黄金吉利娜张永亮陈妍裴毅 【摘要】目的:通过分析不同病期血液中淋巴细胞cyclinD1、P16、P27的表达情况，探索这些指标在癌症发生发展变化中的临床意义。方法:回顾性分析86例经病理诊断的癌症患者的血液学cyclinD1、P16、P27的表达情况，比较稳定和进展组间cyclinD1、P16、P27表达的差异性（其中52例稳定、34例进展），计量资料以(X〖TX-〗±S)表示，采用两独立样本t检验，计数资料采用卡方检验，plt;0．05差异有统计学意义；并采用Logistic回归分析筛选单因素年龄、性别及cyclinD1、P16、P27中能够预测疾病病情的因素。结果:年龄和性别因素在稳定组和进展组之间无明显差异性（pgt;0.05），外周血淋巴细胞cyclinD1、P16的表达进展组均显著高于稳定组（plt;0.05）；P27的表达在稳定组和进展组之间无明显差异性（pgt;0.05）；Logistic回归分析，cyclinD1对病情的预测有统计学意义（plt;0.05）。结论:cyclinD1、P16的高表达提示癌症患者病情可能进展，其中cyclinD1的增高对病情的预测敏感性高，P27的变化对癌情检测没有明确的临床意义。 【关键词】癌症患者;cyclinD1;P16;P27;病情预测 恶性肿瘤的形成是多步骤、多基因改变的积累过程，涉及到多种癌基因的激活和抑癌基因的失活，单一的一种指标已不能确切的判断肿瘤的发生发展，对多基因的综合研究势必能更准确的反映肿瘤的生长和机体的整体状况[1]。本研究试图从细胞周期的失控调节方面，寻找能较准确预测肿瘤病人病期及判断预后情况的指标。 1材料与方法 1.1临床资料:收集2008年~2009年间入住我科治疗的86例经病理诊断的癌症患者，其中52例为经标准抗肿瘤治疗4个周期以上缓解后一直稳定1年未见癌转移的患者，男25例,女27例，中位年龄60岁（41~76岁）；另34例为进展期的癌症患者，其中男23例，女11例，中位年龄62岁（30~82岁）。所有患者均排除影响外周血淋巴细胞水平的疾病（如炎症、过敏、自身免疫疾病等)。 1.2分组:稳定组：经标准治疗至少4个周期的癌症患者，病情持续稳定1年未发生转移。按实体瘤疗效评定lt;肿块变化达CR、PR、SD者；和/或无肿块，肿瘤标志物持续阴性达1年以上者gt;。 进展组：初次发病；或出现新的转移灶；和/或有可观察肿块增大gt;25%，肿瘤标志物任何一项增高(+++)以上并持续3个月以上者。 1.3主要试剂和仪器:鼠抗人cyclinD1、P16、P27单克隆抗体(1：100)购自福州迈新生物技术开发有限公司，异硫氰酸荧光素(F1TC)羊抗鼠IgG(1：400)购自北京华美生物技术开发有限公司，流式细胞仪为美国BD公司FACS420型。 1.4实验方法。 1.4.1取样。稳定组在治疗4个周期后经影像学和实体瘤疗效评价达稳定时，抽血；进展组经影像学和实体瘤疗效评价为进展时，抽血。在清晨、空腹、静卧条件下,取外周血2mL,注入盛有0.01mL0.1%乙二胺四乙酸二钠抗凝剂的试管中混匀. 1.4.2实验步骤。取抗凝外周血2ml，用国产淋巴细胞分离液分离人抗凝外周血中的淋巴细胞，用PBS洗涤，洗涤后用70％乙醇固定过夜。离心去除乙醇，用PBS洗涤，调节细胞浓度为1×106/ml。穿透，加入一抗(使用鼠抗人cyclinD1、P16、P27单克隆抗体)、二抗(FTTC-IgG抗体)，加入1mlPBS缓冲液，并设同型阴性对照．样品放在0~4℃环境中．准备上机检测。l5mW氩离子激光．激光波长488nm。用CellGuest软件自动取每个样品×104个细胞并分析结果，记录样品的荧光指数(FI值)。 1.5统计方法。用SPSS13.0软件包进行统计学处理，实验数据计量资料以(X±S)表示，进行正态及方差齐性检验，结果采用两独立样本t检验，计数资料的比较采用卡方检验，plt;0.05为差异有统计学意义。采用Logistic回归分析筛选年龄、性别及cyclinD1、P16、P27中与预测疾病病情相关的因素。 2结果 2.1稳定组和进展组年龄、性别差异的比较分析。分别采用两独立样本t检验及卡方检验对52例稳定及34例进展的癌症患者进行年龄、性别的比较，分析年龄、性别因素对癌症患者疾病的影响，见表1。 注：分组中，0为稳定组，1为进展组，plt;0.05差异有统计学意义。 表2不同分组性别的比较 注：plt;0.05差异有统计学意义。 表1的结果显示：年龄、性别因素在稳定组和进展组之间差异无统计学意义（pgt;0.05）。