DEAE-Sephadex A-50纯化免疫球蛋白F(ab’)2探究.docVIP

DEAE-Sephadex A-50纯化免疫球蛋白F(ab)2探究 　【摘要】 目的 采用DEAE-Sephadex A-50纯化,提高破伤风抗毒素免疫球蛋白F(ab)2的纯度。方法 破伤风免疫血浆用胃蛋白酶消化、硫酸铵盐析、明矾提纯后的免疫球蛋白F(ab)2 ,经DEAE-Sephadex A-50纯化并进行检测。结果 经上述方法消化2h,95%以上的IgG水解成为F(ab)2 ,经DEAE-Sephadex A-50纯化后破伤风抗毒素免疫球蛋白F(ab)2含量可达75%以上,比活性大幅度提高。结论 DEAE-Sephadex A-50纯化破伤风抗毒素免疫球蛋白F(ab)2是一个较为理想的方法。 【关键词】 破伤风抗毒素 F(ab)2 纯化 DEAE-Sephadex A-50 【Abstract】 Objectives In order to improve the purity of TAT immunoglobulin F(ab)2,we purified it by DEAE-Sephadex A-50.Methods The immunoglobulin F(ab?)2,produced from the tetanus immune plasma which was digested by pepsin,separated by ammonium sulphate,purified by alum,was purified by DEAE-Sephadex A-50 and was carried on all reqired tests.Results After digestion for 2 hours in mentioned situation,over 95%IgG hydrolysis F(ab?)2,and after purification by DEAE-Sephadex A-50,the content of F(ab?)2 reached over 75%,and the specific activity increased greatly.Conclusion Purification of TAT immunoglobulin F(ab?)2 by DEAE-Sephadex A-50 is an ideal method. 【Key words】 tetanus antitoxin(TAT); F(ab)2;purification;DEAE-Sephadex A-50 近年来层析技术已广泛应用于生物高分子的分离和纯化，据报道，国内外一些生物制品厂家采用层析技术进行血浆蛋白分离、疫苗纯化［1］。破伤风抗毒素目前采用盐析法生产的产品存在杂蛋白含量偏高，特别是胃蛋白酶消化后制品中Fc片段无法彻底去除，产品的比活性和F(ab)2含量偏低,临床使用时个别会出现副反应；为进一步提高制品的纯度，笔者采用了DEAE-Sephadex A-50纯化经胃蛋白酶消化、硫酸铵盐析、明矾提纯的破伤风抗毒素，将结果报告如下。 1 材料与方法 1.1 材料 DEAE-Sephadex A-50, 购自瑞典Pharmacia公司；胃蛋白酶, 购自德国MERCK公司；破伤风抗毒素制品由本所血清室提供；破伤风抗毒素标准品（批号0053，效价为6.0 IU/ml）购自中国药品生物制品检定所；试验用昆明小鼠清洁级、英国豚鼠清洁级由本所实验动物室提供。 1.2 方法 1.2.1 DEAE-Sephadex A-50预处理 称取DEAE-Sephadex A-50 100g，悬于10000 ml注射用水中，1h后倾去上层细粒，按每克A-50加0.5N NaOH 15ml的比例，将A-50浸泡于0.5N NaOH中，搅匀，静置30min，装入布氏漏斗（垫有2层尼龙绢丝）中抽滤，并反复用注射用水洗至pH显中性；再以0.5N HCl同上操作过程处理，最后以0.5N NaOH再处理一次；处理完后将A-50浸泡于0.1M,pH7.4 PBS中过夜。 1.2.2 纯化 将已预处理的A-50用布氏漏斗抽干，称重。按比例加入经胃蛋白酶消化、硫酸铵盐析、明矾提纯的破伤风抗毒素免疫球蛋白F(ab)2制品中缓慢搅拌，搅拌结束装入布氏漏斗（垫有2层尼龙绢丝）滤去A-50凝胶。A-50凝胶用不同浓度的NaCl溶液洗涤和洗脱。纯化前后制品进行检测。 1.2.3 检测方法 破伤风抗毒素的热原质、蛋白含量、小鼠中和效力试验、NaCl含量、F(ab)2含量、无菌检查、鉴别试验等项目均按文献［2］进行。 1.2.4 安全试验 1.2.4.1 小鼠试验法 上述方法纯化的3批破伤风抗毒素分别接种体重18～22g。每只小鼠腹腔注射供试品0