FK228促进IL3介导人红系前体细胞增殖及分化.docVIP

FK228促进IL3介导人红系前体细胞增殖及分化 　【摘要】 目的: 探讨组蛋白脱乙酰化酶抑制剂FK228在IL3介导的人红系前体细胞增殖与分化中的调节作用。方法: 经粒细胞集落刺激因子动员的肿瘤患者外周血单核细胞中分离CD34+细胞, 用含干细胞生长因子（SCF）、 白细胞介素3（IL3）或SCF+ IL3及不同浓度FK228的无血清培养液培养7 d, 分别用抗CD14、 GPA、 CD15及CD36单克隆抗体（mAb）染色并行流式细胞术（FCM）检测; 将CD34+细胞用含SCF、 IL3或SCF+IL3及FK228的半固体培养液培养, 并行细胞集落分析; 将CD34+细胞用含SCF+IL3的培养液培养7 d, 然后分离CD36+GPA-细胞, 将细胞用含有IL3+ FK228的半固体培养液中培养, 并行细胞集落分析。结果: FK228以一种剂量依赖方式促进CD36+细胞的产生, 对CD14+细胞及CD15+细胞的产生无明显影响; 0.5 μg/L FK228可明显增加含IL3培养体系中CD36+细胞的数量; FK228可明显增加含IL3的半固体培养基中集落形成的数量及组成单个集落的细胞数; FK228可明显促进CD36+GPA-细胞在含IL3的半固体培养基中形成红细胞集落。结论: FK228可促进白细胞介素3介导的人红系前体细胞的增殖与分化。 【关键词】 组蛋白脱乙酰化酶抑制剂 白细胞介素3 红系前体细胞 增殖 分化 　　组蛋白乙酰化和脱乙酰化在基因转录调节中起着非常重要的作用［1］。研究发现, 组蛋白乙酰化在造血分化过程有起动基因转录的作用［2］。例如, 参与不同谱系的造血细胞前体增殖和分化的转录共激活因子P300和CREB是一种组蛋白乙酰基转移酶［3］。此外。HDACs被发现可能参与急性髓系白血病的发生［4］。HDACs抑制剂已用于髓系白血病和其他血液性恶性疾病的治疗。在正常情况下应用HDACs抑制剂被报道可影响原始造血细胞前体的增殖, 脐血来源的红系前体细胞的分化及α球蛋白在成熟红细胞中的表达［5］。然而, HDACs在正常造血中的作用很大程度上是不知道的。本研究旨在利用HDACs抑制剂FK228探讨HDACs在成人造血中的作用, FK228是从色素杆菌中分离出来的一种天然多肽。FK228在培养液中比较稳定, 它是一种前体药物, 当进入细胞后才转化成为一种活性形式［6］。我们发现FK228可促进白细胞介素3介导人CD34+细胞分化成CD36+GPAlow不成熟红细胞, 但不影响髓系细胞的产生。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 重组人干细胞生长因子（SCF）、 红细胞生成素（EPO）和白细胞介素3（IL3）, 购自Ramp;D Systems公司。HDAC抑制剂FK228购自Fujisawa 制药公司。MACS CD34+免疫磁珠分离试剂盒（MACS）; 购自Miltenyi Biotec公司。PE标记的抗血型糖蛋白A （GPA, 红系祖细胞的一种标记分子 ）单克隆抗体(mAb)为(Becton Dickinson产品), 抗CD14PE、 抗GPAPE、 抗CD15FITC、 抗CD36FITC抗体和鼠IgMFITC、 IgG2bPE Annexin VFITC 凋亡检测试剂盒(为BD Pharmingen公司); 流式细胞仪(Becton Dickinson Immunocytometry Systems, Mountain View, CA, USA)。 　　1.2 方法 　　1.2.1 CD34+细胞的分选 经患者知情同意后, 采集临床肿瘤患者经粒细胞集落刺激因子动员的外周血。利用MACS CD34+免疫磁珠按操作说明从单核细胞中分离CD34+细胞, 经过重复筛选后, CD34+细胞的纯度通常可超过95%。将CD34+细胞在24孔培养板中利用含有SCF+IL3的无血清培养液培养, 细胞因子按如下浓度使用: SCF 50 μg/L; IL3 10 μg/L; 在第3天进行半量换液。培养第7天, 用抗CD36F1TC和抗GPAPE对培养细胞进行染色。然后利用流式细胞术（FCM）分离CD36+GPA-和CD36+GPAlow细胞。 　　1.2.2 细胞培养 将CD34+细胞用含SCF、 IL3或SCF+IL3及FK228的无血清培养液在96孔板中进行细胞悬浮培养。培养3～4 d后, 进行半量换液。利用苔酚蓝染色对活细胞进行计数。对无血清的半固体培养, 将细胞接种于35 mm的培养皿中, 用IMDM培养液培养。经过10～14 d的培养, 对细胞数＜50个的和细胞数＞50个的红细胞集落进行计数, 红细胞集