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PTEN及PCNA在子宫内膜癌组织中表达 　【摘要】 目的 探讨抑癌基因PTEN及增殖细胞核抗原(PCNA)在子宫内膜癌中的表达及临床意义。方法 应用免疫组化SP法检测PTEN和PCNA在18例正常增生期子宫内膜(正常组)、21例子宫内膜不典型增生(癌前病变组)和22例子宫内膜腺癌(内膜癌组)中的表达。结果 正常组、癌前病变组及内膜癌组PCNA表达分别为61.1%(11/18)、71.4%(15/21)和95.5%(21/22)，3组间比较，差异有统计学意义(Plt;0.05)；各组子宫内膜组织中PTEN表达分别为：正常组88.9%(16/18)、癌前病变组71.4%(15/21)、内膜癌组27.3%(6/22)，3组间比较，差异有统计学意义(Plt;0.05)。结论 PCNA表达增强可能是子宫内膜癌在分子水平上的早期变化，PTEN表达减弱可能与子宫内膜腺癌的发生、发展密切相关，二者对早期诊断子宫内膜癌有一定意义。 【关键词】 子宫内膜癌；PCNA；PTEN 子宫内膜癌是女性生殖系统常见恶性肿瘤之一。肿瘤细胞最基本的生物学特征是无限制的增生,增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)是细胞DNA合成期必不可少的因子，其表达状况可以反映肿瘤细胞的增殖活性。抑癌基因PTEN突变或缺失及蛋白表达异常与多种肿瘤的发生、发展密切相关。本研究通过检测正常子宫内膜、不典型增生子宫内膜和子宫内膜癌PTEN、PCNA蛋白的表达水平，探讨其在子宫内膜癌早期诊断中的意义。 　　1 材料与方法 　　1.1 标本来源及分组 　　实验分3组，均选自西安交通大学第二附属医院2001年9月至2003年9月手术切除并经病理证实的存档蜡块。其中子宫内膜癌组22例，患者年龄37-61岁，平均(46.5±10.9)岁，术前均未接受化疗、放疗及激素治疗；癌前病变组选取子宫内膜不典型增生21例，患者年龄31-50岁，平均(41.9±7.3)岁；正常增殖期子宫内膜组18例，患者年龄30-48岁，平均(40.4±6.4)岁。 　　1.2 试剂及方法 　　PTEN和PCNA多克隆抗体购自北京中杉试剂公司。免疫组化采用SP法。主要实验步骤为：组织切片脱蜡至水，微波抗原修复(100℃，15min)，过氧化氢清除内源性过氧化物酶活性，正常羊血清阻断非特异性染色，依次加Ⅰ抗(PTEN 1∶50；PCNA 1∶100)、生物素标记的Ⅱ抗和酶标链霉亲和素孵育，DABH2O2显色。阴性对照采用PBS缓冲液代替Ⅰ抗；阳性对照PCNA应用已知阳性子宫内膜癌组织，PTEN应用已知阳性的扁桃体组织。 　　1.3 结果判断 　　免疫组化阳性反应产物为棕黄色或黄色颗粒，PCNA和PTEN均以细胞核中有棕黄色或黄色颗粒为阳性细胞。参照McCarty KS的评分标准[1]，对子宫内膜的PCNA和PTEN染色进行组织学评分，组织学评分(H)=染色强度(I)×阳性比例(P)。染色强度分为0-3级：不着色为0 级，黄色为1级，棕黄色为2级，黄褐色为3级，2级以上视为阳性；阳性比例为随机选取10个高倍视野，每个视野随机选取100个腺体细胞，计数棕黄色和黄褐色的细胞占所选腺体细胞总数的比例。 　　1.4 统计学分析 　　实验结果应用美国统计软件SPSS12.0分析，组织学评分用(±s)表示。采用χ2检验分析各组染色强度之间的差异，采用方差分析检验阳性表达率之间及组织学评分之间的差异，Plt;0.05为有统计学意义。 　　2 结 果 　　2.1 各组子宫内膜组织中PCNA的表达 　　PCNA阳性细胞为细胞核呈棕黄色。PCNA在正常增殖期子宫内膜组织中表达阳性率最低(61.1%；11/18)，在非典型增生组织中增高(71.4%；15/21)，在子宫内膜癌组织中明显增强(95.5%；21/22)。3组PCNA表达的组织学评分逐渐增大，有显著性意义(Plt;0.05，表1)。表1 各组子宫内膜组织中PCNA蛋白表达情况（略） 　　　2.2 各组子宫内膜组织中PTEN的表达 　　PTEN阳性细胞为细胞核显示棕黄或棕褐色，PTEN在正常增殖期子宫内膜组织中表达增强，阳性率最高(88.9%；16/18)，在非典型增生组织中表达降低(71.4%；15/21)，在子宫内膜癌组织中(27.3%；6/22)明显低于正常内膜组(表2)。3组PTEN表达的组织学评分逐渐降低，有显著性意义(Plt;0.01，表2)。表2 各组子宫内膜组织中PTEN蛋白表达情况（略） 　　3 讨 论 　　细胞的恶性转化是一个多因素影响、多基因调控的复杂过程，其基因突变和表达异常常早于形态学改变。PTEN定位于10号染色体10q23.3区，位于细胞核，可调控细胞周期﹑诱导细胞凋亡﹑调节细胞迁移﹑浸润﹑整