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不同类型DNA聚合酶β基因对CHO细胞影响 　 作者：赵继敏，金戈，黄幼田，杨洪艳，郑智敏，董子明 【关键词】 流式细胞术 Effect of wildtype and mutant DNA polymerase β expression on CHO cells growth 　　【Abstract】 AIM: To study the effects of the DNA polymerase β (DNA polβ) of wild type and the mutant（58 bp deletion） on Chinese hamster ovary cells (CHO). METHODS: The expression of mRNA of wild type and the mutant in transfectant cells was determined by RTPCR and the growth curve of transfected CHO cells was drawn with the MTT assay. The changes in cell cycle were analyzed by flow cytometry. RESULTS: Cell lines stably expressing wildtype and the mutational polβ were established. The CHO cells transfacted by the mutant gene were higher than untransfacted CHO cells in the growth rate of CHO cells and the percentage of S phase cells in vitro (Plt;0.05). The effects of the wildtype enzyme on growth rate and cell cycle were not observed（Pgt;0.05）. CONCLUSION: The wild type and the mutant have different effect on CHO cells. 　　【Keywords】 DNA polβ; transfection; CHO cells; RTPCR; flow cytometry 　　【摘要】 目的：比较野生型和突变型（58 bp缺失）DNA聚合酶β(polβ)基因对真核细胞生长特性的影响. 方法：将表达人野生型和缺失型DNA polβ的中国仓鼠卵巢细胞株（CHO），用RTPCR方法鉴定野生型和缺失型DNA polβ mRNA水平的表达，MTT法测生长曲线、流式细胞术测细胞周期. 结果：转染野生型和突变型DNA polβ的CHO细胞株中，都有外源基因mRNA水平的表达; 转染突变型（58 bp缺失）polβ基因的细胞增殖速度和S期比例增高均高于未转染组细胞，差异有统计学意义(Plt;0.05). 而转染野生型polβ基因对细胞增殖速度和细胞周期无明显影响（Pgt;0.05）. 结论：高表达外源性野生型和突变型DNA polβ，对CHO细胞生长具有不同的影响. 　　【关键词】 DNA polβ; 转染; CHO细胞; RTPCR; 流式细胞术 　　0引言 　　碱基切除修复（base excision repaire, BER）是清除细胞内DNA损伤的主要途径，DNA聚合酶β（DNA polymerase β，DNA polβ）是BER过程中的关键酶. 研究polβ基因的突变及功能异常在肿瘤发生发展中的作用，对进一步阐明肿瘤的分子发病机制,对肿瘤的基因治疗有重要意义. 我们将不同类型的polβ的真核表达载体转染哺乳动物细胞，观察野生型和突变型polβ基因的表达对细胞生物学特性的影响如下. 　　1材料和方法 　　1.1材料 　　中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells, CHO)由陈萍萍博士惠赠, DMEM培养基为Hyclone公司产品, Trizol总RNA提取试剂盒为Gibco公司产品. CHO细胞用含100 mL/L胎牛血清的DMEM培养基、50 mL/L CO2, 37℃, 饱和湿润空气中培养. 　　1.2方法 　　1.2.1表达产物的mRNA水平的鉴定按Trizol试剂盒操作说明，分别提取野生型和突变型polβ转染和空载体转染的CHO细胞及未转染CHO细胞总RNA. 紫外分光光度计测定其浓度. 逆转录反应体系总体积为30 μL,反应体系中含1 mmol/L dNTP, 2.5 μmol/L随机引物，166.7 nkat R