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两步法扩增诱导脐血及动员外周血CD34+细胞来源树突状细胞比较 　 作者：王亚非 孟恒星 葛薇 于珍 李云涛 李桥川 万长春 徐燕 李新 李增军 王国蓉 尤胜国 邱录贵 【摘要】 　　为了比较先扩增、后诱导的两步法从脐血（CB）CD34＋细胞和动员外周血（MPB）CD34＋细胞诱导所得DC的产量及功能，将免疫磁珠分选获得的CB-CD34+细胞和MPB-CD34＋细胞用FL、TPO、SCF、GM-CSF等细胞因子先扩增10天，然后加入GM-CSF、IL-4及TNF-α、CD40Ab、PGE2等细胞因子组合诱导获得DC。采用流式细胞仪检测DC表型，混合淋巴细胞培养检测DC刺激异基因T细胞增殖能力，ELISA法检测DC分泌IL-12能力，Transwell板检测DC在次级淋巴组织趋化因子（SLC）介导下的趋化功能。结果表明： ① 扩增10天时CB组、MPB组细胞中CD14+CD1a-细胞含量无显著差异［（40.48±16.85）% vs （28.07±23.19）%， Pgt;0.05］。但由于CB组细胞扩增倍数显著高于MPB组（388.88±84.63倍vs 79.67±10.32倍， Plt;0.01），CB组CD14+CD1a-细胞扩增倍数显著高于MPB组（189.42±25.02倍vs 28.74±23.27倍， Plt;0.01）； ②TNF-α/CD40Ab/PGE2条件下与TNF-α条件下相比，CB组和MPB组所得DC均表达更高的CD83［分别为（34.52±11.22）% vs （3.70±2.27）%、（36.69±13.36）% vs （7.34±3.364）%， P均lt;0.01］； ③CB组与MPB组在TNF-α/CD40Ab/PGE2诱导条件下所得DC均高水平表达CD83、CD86、HLA-DR、CD11c、CD54、CD40，CB组所得CD83+细胞的扩增倍数显著高于MPB组（198.72±117.53倍vs 33.95±6.19倍，Plt;0.01）； ④CD40Ab/PGE2/TNF-α条件下CB与MPB来源的DC在刺激异基因T细胞增殖、IL-12的分泌［（16.2±4.31）pg/ml vs （13.5±4.1）pg/ml］以及SLC介导的迁移率［（28.09±7.76）% vs （18.5±3.47）%］上均无显著差别（P均gt;0.05）。结论： 在两步法培养体系下，CB-CD34+细胞与MPB-CD34+细胞来源的DC具有相同的功能，而前者产量显著高于后者。 【关键词】 树突状细胞 脐血 动员外周血 CD34＋细胞 两步法培养法 　　　Comparison of Expanding Dendritic Cells Derived from Cord Blood and Mobilized Peripheral Blood by Two-step Culture Method 　　　AbstractTo compare the expansion efficiency and function of dendritic cells derived from CB-CD34+ cells and MPB-CD34+ cells by using two-step culture method， enriched CB-CD34+ cells or MPB-CD34+ cells with immunoadsorption were primarily cultured in the presence of FL, SCF, TPO， GM-CSF for 10 days, and then further cultured with a combination of GM-CSF,IL-4,TNF-α,CD40Ab and PGE2 to induce DC. The DC phenotypes were detected by flow cytometry, the expansion efficiency and cell function were evaluated by mix-lymphocyte reaction(MLR), IL-12 level was detected by using ELISA and the chemotactic function mediated by secondary lymphoid tissue chemokine (SLC) was determined with Transwell plate. The results indicated that after 10 days of expansion, there were no