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中草药清除超氧自由基极谱法探究 　 作者：陈立新， 谢治民， 谭年元 【摘要】 比较了几种自氧化体系产生超氧自由基的效果，选定邻苯三酚自氧化体系产生超氧自由基，用单扫描示波极谱法扫描，研究8种中草药对超氧自由基的清除作用。 【关键词】 中草药; 单扫描示波极谱法; 超氧自由基; 清除作用 　　Abstract:The effects of producing the superoxide free radicals by the several of oxidation system have been studied. The pyrogallol acid was used by single-sweep oscillopolarography to determine the scavenging superoxide free radical activity against of eight Chinese drugs. 　　Key words:Chinese drugs; Single sweep oscillopolarography; Superoxide free radical; Scavenging effect 　　自由基在人体内能引起机体氧化，损害细胞，导致机体衰老和各种疾病。自由基是一种外层轨道含有未配对电子的特殊状态分子或原子团，其中超氧自由基(O-2·)与人体最为密切。一些物质，如超氧化物歧化酶(SOD)、维生素C、维生素E、胡萝卜素等能清除人体的自由基。但体内的O-2·浓度随年龄的增长而增加，自由基清除能力则随年龄的增加而减少，有时不能提供足够的量来消除O-2·[1]。因此研究和寻找外源性O-2·清除剂在人体保健、治病方面具有重要意义，从天然动植物，尤其是从具有悠久历史的中草药中寻找高效的超氧自由基清除剂，已引起了国内外学者的极大兴趣[1～5]。 　　分子氧在单电子还原时有超氧阴离子自由基O-2·中间体生成。O-2·既可作为电子的给予体，又可接受电子，在体内可通过电子转移反应衍生出其它活性氧。从研究的角度来说，获得O-2·大体有多种方法[6,7]。本文采用化学法产生O-2·，且对比了邻苯三酚[8,9]、亚甲基兰、二甲基亚砜生成O-2·的效率。 　　中草药含有多种能够清除自由基的化合物，其抗氧化成分可归纳为6大类：黄酮类、苯酚类、皂苷类、鞣质类、生物碱类和其他类[9～11]。近年来对中药抗自由基作用的研究多采用电子自旋共振、化学发生等方法，用电化学方法研究中药对超氧自由基的清除作用报道较少。但是后者也有其优势所在，所用仪器简单，操作简单，成本低，相对于化学发光法，不受到溶液颜色和惰性杂质的影响。本文利用电化学分析方法，研究了几种中草药对超氧自由基的清除作用，对推动进一步研究中草药在延缓机体衰老方面将发挥有利作用。 　　1 仪器和试剂 　　JP-303型极谱分析仪(成都分析仪器厂);滴汞电极、饱和甘汞电极和铂电极组成的三电极系统;电子天平(AL104，梅特勒-托利多仪器有限公司);PHS-3C型酸度计(萧山市分析仪器厂)。 　　邻苯三酚(宜兴兴隆化工有限公司)，三羟甲基氨基甲烷(上海山浦化工有限公司)。 　　其余试剂均为国产分析纯，实验用水均为二次蒸馏水。 　　红花、何首乌、当归、苡米、白芷、丹参、黄芩、茯苓8种中草药购于药材公司，经检验均为正品。 　　2 方法与结果 　　2.1 超氧自由基化学发生体系的比较 　　2.1.1 方法邻苯三酚、亚甲基兰和二甲基亚砜均能发生自氧化反应产生超氧自由基阴离子，研究了三者产生超氧自由基阴离子的效率。 　　分别制取0.2 mmol/L邻苯三酚溶液、1 mg/ml亚甲基兰溶液、3.5 mg/ml二甲基亚砜溶液、0.2 mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液、pH=9.0的NH3-NH4Cl缓冲溶液。 　　在25.0 ml的0.2 mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液中加入5.0 ml的0.1 mol/L盐酸，稀释至100 ml，得到pH=9.0的缓冲溶液。取10.0 ml为底液，加入1.0 ml的0.2 mmol/L邻苯三酚溶液，再加2.00 ml蒸馏水。采用线性扫描法记录二阶导数极谱波。 　　移取10.0 ml pH=9.0的NH3-NH4Cl缓冲溶液，加入1.0 ml的3.5 mg/ml二甲基亚砜溶液，再加2.0 ml蒸馏水。采用线性扫描法记录二阶导数极谱波。 　　移取10.0 ml pH=9.0的NH3-NH4Cl缓冲溶液，加入1.0 ml的1 mg/ml亚甲基兰溶液，再加2.0 ml蒸馏水。采用线性扫描法记录二阶导数极谱波。 　　2.1.2 结果讨论在pH=9.0的HC1-Tris缓冲溶液中，邻苯三酚可发生自氧化反应产生超氧自由基阴离子，在-0.676 V处有一还原峰