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怀地黄及怀山药多糖同步提取工艺探究 　【摘要】 　　目的对怀地黄［Rehmannia glutinosa f.Yhueichingensis (Chan et Schih)Hsiao，简称RG］多糖和怀山药(Dioscorea opposite Thumb f.Yhueichingensis Hsiao，简称DT)多糖同步提取方法的工艺参数进行了研究。方法选取提取温度、提取液pH、固液比3个因素，以多糖含量作为指标，通过L9(33) 正交实验确定最佳工艺参数。结果怀山药与怀地黄多糖同步提取的最佳工艺参数为：浸提温度65℃，浸提液pH 5.5，固液比为1∶30；浸提液浓缩比为4∶1，沉降剂乙醇添加量5倍于浸提液体积；采用Sevage法去除蛋白质，提取得到的怀山药与怀地黄同步多糖含量及得率可分别为73.68%和12.67%。结论用同步提取法得到的多糖含量及得率优于分步提取。 【关键词】 怀地黄多糖 怀山药多糖 同步提取 混合多糖 　　怀山药，又名山芋、菜山药，为薯蓣科多年生缠绕型草本植物，以根茎入药［1］。山药多糖是山药中的主要活性成分。怀地黄具有止血和促进血细胞增殖的药理活性，同时可以通过影响白血球和血小板来抗炎［2］。怀地黄在中医药中被认为是治疗糖尿病的“四大圣药”之一，现代药理研究也证明其具有降血糖的作用［3］。研究表明怀山药多糖与怀地黄多糖同步后对四氧嘧啶导致糖尿病的小鼠具有较好的治疗效果［4］。由于目前天然产物提取往往采用分步提取而忽略大多天然产物多糖需要进行复配才能起到有效的效果，因此对天然产物进行同步提取可以简化提取步骤，提高多糖含量。 　　1 材料与仪器 　　怀地黄（购于河南省焦作市）；怀山药（购于河南省焦作市）；乙醇、正丁醇、三氯甲烷、葡萄糖、苯酚试剂均为分析纯,浓硫酸为优级纯；SP-2000UV型紫外可见分光光度计（上海第三分析仪器厂），薄膜蒸发仪（德国Heidolph公司）。 　　2 方法 　　2.1 怀山药与怀地黄多糖同步提取及怀山药工艺流程 　　2.1.1 怀山药与怀地黄多糖同步提取工艺 取一定量怀地黄、怀山药，粉碎至100目，加入30倍水，浸提4 h，离心收集得到第1次浸提液。向药渣中加入20倍水、90℃下、浸提2 h后离心收集得到第2次浸提液，合并两次收集的浸提液，减压浓缩。Sevage法除蛋白，重复两次，乙醇沉淀后，离心回收沉淀，真空干燥得怀山药与怀地黄同步多糖粗品。 　　2.1.2 怀山药多糖分步提取工艺［5］取一定量怀山药，粉碎至100目，加入20倍水，纤维素酶加量7.5%，65℃浸提4 h，离心收集得到第1次浸提液。向药渣中加入25倍水、90℃下、浸提2 h后离心收集得到第2次浸提液，合并两次收集的浸提液，减压浓缩。Sevage法除蛋白，重复两次，乙醇沉淀后，离心回收沉淀，真空干燥得怀山药多糖粗品。 　　2.1.3 怀地黄多糖分步提取工艺［6］ 取一定量怀地黄，粉碎至100目，加入20倍水，纤维素酶加量7.5%，65℃浸提4 h，离心收集得到第1次浸提液。向药渣中加入25倍水、90 ℃下、浸提2 h后离心收集得到第2次浸提液，合并两次收集的浸提液，减压浓缩。Sevage法除蛋白，重复两次，乙醇沉淀后，离心回收沉淀，真空干燥得怀地黄多糖粗品。 　　2.2 同步多糖蛋白质脱除方法［7］ 　　2.2.1 三氯乙酸法［8］（TCA法） 收集100 ml怀地黄与怀山药浸提液，加入100 ml 30％的三氯乙酸溶液，静置，离心，上清液减压浓缩至原液体积1/4，加入5倍于浓缩液体积的95％乙醇，静置，离心，收集沉淀物，分析怀山药与怀地黄多糖含量及得率。 　　2.2.2 Sevag法［9］ 收集100 ml怀地黄与怀山药浸提液，加入20 ml的Sevag试剂（氯仿与正丁醇体积比为5∶1的同步液），剧烈振荡30 min，离心，回收上层清液，重复上述步骤，进行第2次蛋白的去除，离心后取上层清液减压浓缩至原液体积1/4，加入5倍于浓缩液体积的95％乙醇，静置，离心，收集沉淀物，分析怀山药与怀地黄多糖含量及得率。 　　2.3 浸提液浓缩倍数与乙醇添加量对同步多糖提取得率的影响 称取怀地黄40 g，热水浸提后，3000 r/min离心30 min，收集浸提液3200 ml，各取200 ml采用不同的浓缩倍数和沉降剂（乙醇）添加量进行沉降，3500 r/min离心，收集沉淀物，分析同步多糖得率。 　　2.4 正交实验法优选怀山药与怀地黄多糖（1∶1）提取工艺怀山药、怀地黄多糖同步提取中，为了获得最大多糖含量，并结合生产实际，选择提取温度、提取液pH值和固液比3个主要工艺参数作为考察因素，每因素选取3个水平，按L9(33)正交表安排实验，以同步多糖含量作为衡量提取效率的指标，优选最佳工艺参数。为了提高其统计分析的可靠