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全菌体灭活菌苗现状及新策略 　　　摘要 对全菌体灭活菌苗（WCV）防治传染病已进行了广泛的，WCV是预防疾病的一种、安全、有效的，但WCV的缺点是，胃肠外免疫能引起不良反应，而口服免疫常需大剂量，县免疫力短暂。近期研究表明，能提高WCV免疫原性和增强口服免疫应答的新方法极有希望提高这些菌苗的效力。 　　动物模型和人研究显示，WCV口服或胃肠外免疫均具有免疫原性，也具有预防呼吸道、肠道和全身性细菌感染的效力。虽然仅百日咳WCV被普遍，但其他WCV也具有普遍应用的潜力。本文报道了WCV研制的进展，重点阐述了制备更优质菌苗制剂的可能性。 　　肠道菌苗 　　空肠弯曲菌 　　空肠弯曲菌是引起胃肠炎的主要原因，估计全世界每年发病4亿多例。某些地区的罹患率高达2.5万~4万/10万。这种病原菌感染的主要后遗症是Guillain-Rarré综合征。一种传统的空肠弯曲菌菌苗已在动物中进行试验，这种菌苗（福马林和加热共同灭活，3剂）通过口饲给予小鼠，每剂间隔2天，并以大肠杆菌不耐热肠毒素（LT，25μg）为佐剂。免疫后4周在口服攻击模型中评估各种剂量的含和不含佐剂菌苗（105、107或109个细菌）的效力。用活空肠弯曲菌（108个细菌，100×半数定居量）攻击动物，并监测排菌情况。最大剂量菌苗和较小剂量含LT菌苗能预防定居，含或不含佐剂的菌苗均能预防细菌全身播散。两种配方的菌苗接种小鼠后，均检得空肠弯曲菌特异性血清IgA和IgG升高，但仅在含LT菌苗免疫小鼠中检得肠道IgA。 毕业论文 　　这种菌苗还在恒河猴中进行试验。猴子间隔14天接种2剂1010空肠弯曲菌菌苗加0.5~1000μgLT，未见不良反应。部分动物在6周时接受1剂加强免疫。不管菌苗（福马林灭活）是否含LT，接种者对空肠弯曲菌的特异性T细胞应答均增强。由于初免程序后已获得最大应答，因此无需加强免疫。免疫后7天，IgA分泌细胞在含LT菌苗接种动物中增多。 　　第2种空肠弯曲菌菌苗已产生，正在进行Ⅱ期攻击研究评估。这种菌苗是利用能生产“抗原增强”菌苗的营养信号转导（NST）技术制备的。制备菌苗所用的细菌是通过专门方法培养的，其对INT-407和Ca-Co-2人肠上皮细胞的粘附力和侵袭力均增强，并在福马林灭活前与刚果红的结合力提高。这些表型被认为是空肠弯曲菌和其他肠道病原菌毒力和相关抗原表达的重要标志。为了获得这些特征，可将细菌置于含0.1%脱氧胆酸钠的脑心浸液肉汤中，37℃、10%CO2条件下培养至稳定期。 　　用上述细菌制备的NST菌苗在动物中的免疫原性强于传统方法制备的菌苗。NST菌苗免疫鼠肠道产生的抗原特异性IgA大于传统菌苗免疫鼠。口服含LT nST菌苗的雪貂产生的血清IgG水平比含佐剂传统菌苗免疫雪貂高15倍。用同源泉空肠弯曲菌口饲攻击雪貂，17%的NST菌苗免疫动物发病，而接受传统菌苗的动物的发病率达67%。 毕业论文 　　产肠毒素性大肠杆菌 　　产肠毒素性大肠杆菌（ETEC）是造成儿童严重脱水性腹泻的最主要细菌，估计每年发病4亿例，死亡70万例。ETEC是造成者腹泻的主要原因，仅美国就800万人。表达定居因子CFA/Ⅰ和CFA/Ⅱ的ETEC经福马林灭活制成的菌苗已在人中进行评估。间隔2周口服3剂含或不含霍乱毒素B亚单位（CTB）的菌苗（1011个细菌/剂，5个菌毛型），免疫后7天检测外周血抗体分泌细胞（ASC）。对CFA/ cFA/Ⅰ和CFA/Ⅱ抗原产生应答的细胞主要是产生IgA的ASC，其次是IgM-ASC，IgG-ASC极少。2剂后的免疫应答最强。CTB不能增强对CFA/Ⅰ和CFA/Ⅱ抗原的应答。检得对CTB产生应答的IgA-ASC，IgG-ASC，未检得IgM-ASC，尽管对CFA的局部IgA应答极少与血清抗体水平的升高有关。在埃及进行的ETEC/重组CTB菌苗的研究中，74名21~45岁成人间隔2周接受2剂菌苗或安慰剂。受试者对CTB、CFA/Ⅰ、CS4、CS2和CS1的外周血IgA b细胞应答率显著高于对照者。对灭活WCV产生强免疫应答的发现是重要的，因为口服纯化的定居因子诱发的免疫应答微弱，且无保护作用。对菌苗的特异性T细胞应答也进行了评估。从接种者分离的人外周血单个核细胞中观察到中等度的CFA依赖性体 外增殖应答，用定居因子体外刺激应答细胞可产生高水平的γ干扰素（IFN-γ），未检得白细胞介素2（IL-2）。应答细胞主要是CD4+T细胞，CD8+细胞较少。高水平IFN-γ的产生可能具有免疫学意义。IFN-γ能刺激B细胞分泌抗体，增加肠细胞分泌组分的表达。这种类型的应答除产生IgA分泌细胞外，还能介导对ETEC攻击的防御作用。 毕业论文 　　受试者还接种了由大肠菌素E2处理灭活的ETEC菌苗。这种灭活方法能杀死菌苗，且不为化学或