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吸烟者树突状细胞功能状态探究分析 　【摘要】 目的 研究吸烟者树突状细胞(DC)的功能。方法 分离吸烟者和非吸烟者外周血单个核细胞(PBMC)，在含粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素4(IL-4)的培养条件下制备DC。流式细胞仪检测DC表面CD86的表达；混合淋巴细胞反应(MLR)检测DC对T淋巴细胞的刺激能力；酶群免疫吸附法(ELISA)测定MLR上清液中细胞因子水平。结果 与非吸烟者比较，吸烟者DC表面CD86的表达明显增高，对T淋巴细胞的刺激能力增强；致炎细胞因子(IL-1β)分泌增多，抑炎因子(IL-10)分泌减少。结论 吸烟者DC明显激活，可能是吸烟致动脉粥样硬化的机制之一。 【关键词】 吸烟；树突状细胞；细胞因子；动脉粥样硬化 【Abstract】 Objective To investigate the function of dendritic cells (DCs) in smoking person.Methods DCs were derived from human periphery blood monocyte cells (PBMCs) upon culture with interleukin-4 (IL-4) and granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) from smoking person.The surface co-stimulatory factor CD86 (7-2) of DCs were assessed by flow cytometry.Immunostimulatory capacity was measured by mixed lymphocyte reaction (MLR). ELISA was used to analyze the level of cytokines (IL-1β，IL-10).Results Much more CD86 was expressed on DCs from smoking person.The stimulating capacity of DCs in MLR was higher，and the T lymphocytes in MLR produced higher levels of pro-inflammation cytokines and lower levels of restrin-inflammation cytokines，compared with normal group.Conclusion DCs of smoking person are activated，which may play an important role in the progress of atherosclerosis (AS). 近年发现免疫炎性反应在促进动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)发病中起重要作用［１］。研究发现体内功能最强的专职性抗原提呈细胞树突状细胞(dendritic cell，DC)在AS斑块中聚集增多，提示其所介导免疫炎性反应参与了AS的发生和发展［２］。吸烟是心脑血管疾病的重要危险因素之一［３］，有观察表明吸烟可激活体内的炎性反应［４］，但吸烟是否影响DC功能从而促进AS的发生与发展，目前尚少有报道。本文通过观察吸烟者DC的功能状态，进一步阐明吸烟致AS的可能机制。 1 对象与方法 1.1 研究对象 选取吸烟和非吸烟者各30例，两组年龄、性别等无明显差异。所有对象均排除急慢性炎性疾病、自身免疫性疾病及肿瘤，未用激素及免疫抑制剂。 1.2 材料 RPMI1640(L-glutamine)培养基、胎牛 血清(FCS)购自Gibco公司；淋巴细胞分离液购自天津灏洋生物制品有限公司；四唑盐(MTT)、二甲亚砜(DSMO)购自广州威佳公司；重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白介素-4(rhIL-4)购自英国Peprotech公司；PE标记的鼠抗人CD86(B7-2)单抗购自Biolegend公司；白细胞介素-1β(IL-1β)、白介素-10(IL-10)ELISA试剂盒购自美晶公司。 1.3 方法 1.3.1 DC制备 抽取受试者外周血20ml，淋巴细胞分离液中离心(2000r/min，20min)，收集单个核细胞(PBMC)，PBS冲洗2次，RPMI 1640冲洗1次，用完全RPMI 1640(含10%FCS)在6孔培养板中培养2h(37℃，5%CO2)，去掉非贴壁细胞。贴壁细胞用完全RPMI 1640(含10%FCS、rhGM