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复方白毛夏枯草免疫调节作用实验探究 　 作者：王文佳，李海峰，欧江琴，田维毅 【摘要】 目的探讨复方白毛夏枯草对实验小鼠免疫功能的影响。方法实验小鼠随机分为复方白毛夏枯草大、中、小剂量组和生理盐水对照组，给予相应的药物及生理盐水灌胃7 d后，测定胸腺指数、脾脏指数、EA花环形成率、吞噬细胞吞噬中性红的能力、脾淋巴细胞转化能力、血清IgG及IgM含量。结果与生理盐水对照组比较，复方白毛夏枯草各组小鼠的胸腺及脾脏指数无明显差异（P＞0.05）；腹腔巨噬细胞的数量明显增加（P＜0.05），同时吞噬能力也明显增强（P＜0.05或P＜0.001），以中、大剂量用药组最显著；血清中免疫球蛋白IgG的含量明显升高（P＜0.05或P＜0.01），大剂量用药组含量最高，而血清中免疫球蛋白IgM的含量无明显变化（P＞0.05）；脾脏淋巴细胞增殖能力有显著提高（P＜0.01或P＜0.05或P＜0.001），以大剂量用药组增殖最显著。结论复方白毛夏枯草对实验小鼠免疫功能总体上表现为增强效应。 【关键词】 复方白毛夏枯草； 小鼠； 免疫调节 复方白毛夏枯草由苗药白毛夏枯草、麦冬等组成，具有清热解毒、止咳化痰、消肿润肺之功，是贵州省少数民族用于治疗上呼吸道感染的经验方，对上呼吸道感染引起的发热、咽痛、久咳不止等症效果尤为明显。为探索该方的临床疗效机制，笔者对其免疫调节功能进行初步研究，为其临床应用提供药理学依据。 　　1 材料与仪器 　　1.1 动物及分组 　　健康昆明种小鼠120只,体质量(20±2)g,雌雄不分,贵阳医学院实验动物中心提供,合格号为SCXK（黔）2002-0001。随机将小鼠分为4组，即复方白毛夏枯草大剂量组、中剂量组、小剂量和生理盐水对照组，每组30只，雌雄分笼饲养。 　　1.2 仪器与试剂 　　USA3131型CO2培养箱（美国热电），EIX808U型全自动酶标仪（美国BioTek）、BSC1800-Ⅱ-A/B3型生物安全柜（上海瑞仰），小鼠IgG、IgM酶联免疫试剂盒（批号分别为080418、080110,上海门谍塔生物科技发展有限公司）；四甲基偶氮唑盐(MTT)（ Phamacia 公司），植物血凝素（PHA）（Sigma 公司），RPMI-1640营养液（Serva 公司），中性红(Amresco 公司) ,兔抗羊红细胞抗体（A）（河南知微生物工程有限公司），10%绵羊红细胞悬液（E）、3%硫乙醇酸钠溶液，Hank，s液，以上试剂均按常规方法配置。 　　2 方法 　　2.1 药物及给药方法 　　将复方白毛夏枯草各药材依验方比例配伍，常规制备水煎剂，按成人临床用药量换成小鼠用药量，调整浓度为大、中、小3个剂量（分别相当于生药1，0.5，0.25 g/ml）备用。各给药组小鼠每次分别按10，5，2.5 g/kg灌服复方白毛夏枯草水煎剂，对照组代以等量生理盐水，2次/ d，连续灌胃7 d。所有动物按常规饲养。 　　2.2 免疫指标检测 　　2.2.1 胸腺指数、脾脏指数检测 　　给药结束次日，各组随机取小鼠10只，摘眼球无菌取血并分离血清备用；同时，脊椎脱臼处死小鼠后，取胸腺、脾脏称湿重并计算胸腺和脾脏指数［胸腺或脾脏质量(g)与每100 g体质量的比值］。 　　2.2.2 EA花环法测定巨噬细胞FC受体　 　　实验按照文献方法进行［1］。在显微镜下，以周围粘附5个或5个以上EA的巨噬细胞为EA花环阳性,随机计数200个巨噬细胞，算出EA花环阳性百分率。 　　2.2.3 ELISA测定血清IgG、IgM 含量 　　 　　使用上述血清0.1 ml,按照ELISA 试剂盒操作说明测定小鼠血清中IgG、IgM量。 　　　2.2.4 中性红比色法检测吞噬细胞吞噬能力 　　按文献方法［2］。在末次给药后，各组随机取小鼠10只，腹腔注射3%硫代乙醇酸钠0.02 ml/g体质量，6 h后无菌取腹腔液，常规制备小鼠腹腔巨噬细胞,并调整浓度至1×106/ml，加至96孔板中，100 μl/孔，置37℃、5%CO2培养箱贴壁孵育2 h，弃去上清，加0.072%中性红溶液100 μl/孔，继续孵育30 min，弃去上清，以Hank’s液洗3次，加入DMSO 100 μl/孔，置4℃冰箱过夜，置酶标仪490 nm处测定各孔OD值。 　　2.2.5 MTT比色法测定脾脏淋巴细胞增殖能力 　　参考文献方法［3］。各组剩余小鼠末次给药后2 h, 无菌取脾细胞，常规制备小鼠脾细胞悬液,并调整浓度至2×106/ml，加至96 孔培养板中l00 μl/孔,再加入含3%PHA完全RPMI-1640培养液100 μl/孔,另设对照组加入不含PHA的完全RPMI-1640 培养液100μl/孔，每个样品设3个复孔，置37℃、5%CO2培养箱中贴壁培养72h，吸上清