急性冠脉综合征患者外周血单个核细胞miR-146a表达医学方法.doc

急性冠脉综合征患者外周血单个核细胞miR-146a表达医学方法 　作者简介：郭敏，现工作于山西医科大学第一医院（邮编：030001）；闫蕊，工作于山西医科大学护理学院；吕吉元、范春雨，工作于山西医科大学第一医院。 论文代写 　摘要：目的 研究急性冠脉综合征（ACS）患者外周血单个核细胞内MicroRNA146a (miR146a)基因的表达，并探讨炎症因子及其表达水平的相关性。方法 分离26例急性心肌梗死（AMI）、25例不稳定型心绞痛（UA）、22例稳定型心绞痛（SA）、18例胸痛综合征（CPS）患者外周血单个核细胞（PBMC），采用Realtime PCR法及Northern blot法检测各组患者PBMC中miR146a的表达水平，同时，将分离的PBMC在体外经植物血凝素（PHA）刺激培养后，采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测培养基上清中促炎因子肿瘤坏死因子（TNFalpha;）、gamma;干扰素（IFNgamma;）及抗炎因子白介素（IL10）的表达水平，并对miR146a与炎症因子的表达进行相关性研究。结果 AMI组和UA组患者miR146a基因表达明显高于SA组与CPS组（Plt;0.05），而SA组和CPS组间差异无统计学意义(Pgt;0.05)。ELISA结果显示，AMI组及UA组培养基上清中TNFalpha;、IFNgamma;明显高于SA组及CPS组（Plt;0.01），而IL10表达明显并无显著变化(Pgt;0.05)。相关性研究发现，miR146a 的表达与TNFalpha;、IFNgamma;浓度呈显著正相关（Plt;0.05）。结论 ACS患者miR146a表达明显增加，并与促炎因子表达呈正相关，提示miR146a功能亢进可能参与了ACS炎症反应过程，可能是动脉粥样硬化不稳定斑块的发病机制之一。 　关键词：急性冠脉综合征；miR146a；炎症反应；动脉粥样硬化 　中图分类号：R541.4 R256.2 文献标识码：B 文章编号2012　目前多数学者认为动脉粥样硬化（AS）是在大、中动脉血管壁内皮细胞损伤后细胞免疫所接到的慢性炎症反应［1］。随着对动脉粥样硬化发病机制及危险因素的深入了解和积极控制，慢性心血管病的一级预防取得了令人鼓舞的进展，然而急性心血管事件（包括心脏性猝死和急性冠状动脉综合征）的预防及治疗仍缺乏有效的措施。近年研究发现，导致急性心血管病事件的主要原因是AS斑块的易损性，而炎症在易损斑块发生机制中的核心作用日益受到重视［2］。 　MicroRNA是一组最近发现的内源性的非蛋白编码调控RNA，这些含有19个～23个核苷酸单链RNA可以通过与靶基因mRNA的3 UTRs不同程度的互补结合，以降解靶基因mRNA或抑制翻译两种方式调节生物体内基因的表达［3］。晚近研究提示，MicroRNA(miR146a)在T细胞、B细胞、单核细胞中均有表达，并与多种炎症因子及转录因子的活性有密切关系，在免疫反应中miR146a 可能发挥了精细的调控作用［4］。本研究通过对急性冠脉综合征患者外周血单个核细胞内miR146a表达水平的检测及其与炎症因子相互关系的探讨，为miR146a在ACS中的基础研究奠定基础。 论文代写 　1 资料与方法 　1.1 研究对象 2011年7月”2012年2月在我院住院及门诊随访的患者91例，其中急性心肌梗死（AMI）26例，不稳定型心绞痛（UA）25例，稳定型心绞痛（SA）22例，胸痛综合征（CPS）18例，所有患者均行冠状动脉造影检查。CPS组为胸痛但不伴有心电图改变和冠状动脉狭窄及痉挛［5］。 　排除标准：合并严重的肝肾功能不全；心脏或其他部位的急、慢性炎症；合并脑卒中；恶性肿瘤；风湿性疾病；高热以及应用炎症抑制药物如非甾体类抗炎药、类固醇及鸦片类药物等。 　1.2 研究方法 　1.2.1 血样采集 AMI与UA患者均在发病24 h内从前臂周围静脉采取空腹血标本，SA组和CPS组于冠状动脉造影时采血3 mL,肝素钠抗凝。 　1.2.2 Realtime PCR法检测miR146amRNA的表达 淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞（PBMC），用miReasy Mini Kit试剂盒提取lt;200bp RNA，每组设10 mu;L RT反应体系采用miScript Reverse Transcription Kit试剂盒进行逆转录反应，取5 mu;L cDNA模板采用the miScript Primer Assay 及the miScript SYBR Green PCR Kit试剂盒进行PCR。miR146a扩增应用miScript通用引物及其特异性引物(5prime; UGAGAACUGAAUUCCAU