氧耗剂致乳鼠心肌缺氧-复氧模型建立.docVIP

氧耗剂致乳鼠心肌缺氧/复氧模型建立 　 作者：余薇，许波，彭彦，吴基良，李璐 【摘要】 目的探讨利用氧耗剂建立乳鼠心肌缺氧/复氧损伤模型的一种新方法。方法取SD乳鼠原代心肌细胞培养，观察氧耗剂连二亚硫酸钠不同浓度(1，2，3，4，5 ，6 mmol/L)分别缺糖缺氧1 h复氧 24 h及在4 mmol/L浓度下缺糖缺氧不同时间(5 min，15 min，30 min，1 h，2 h，4 h，6 h)后复氧24 h对心肌细胞存活率及培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的影响，并进行细胞形态学观察。结果乳鼠心肌细胞经过缺氧/复氧处理后，与正常对照组相比，连二亚硫酸钠可呈浓度依赖性降低心肌细胞存活率，尤其 Na2S2O4 浓度大于3 mmol/L时细胞MTT的OD值与正常对照组有显著性差异，同时上清液中LDH含量升高，差异具有统计学意义(Plt;0.05或Plt;0.01)。而当连二亚硫酸钠4 mmol/L浓度下随着缺氧时间延长，细胞的存活率显著降低，而心肌细胞上清液中LDH的释放量显著升高，差异具有统计学意义(Plt;0.05或Plt;0.01)，呈现时间依赖性。结论应用连二亚硫酸钠可建立心肌细胞缺氧再灌注损伤模型。 【关键词】 心肌细胞; 缺氧; 复氧; 细胞模型; 连二亚硫酸钠 　　Abstract：ObjectiveTo establish hypoxia/ reoxygenation model in neonatal rat cardiomyocytes by oxygen agent.MethodsCultivate neonatal rat cardiomyocytes, observe the apoptotic cardiac myocyte by using MTT assay and after being given Na2S2O4 with different concentration (1 ,2 ,3 ,4 ,5 ,6 mmol )for 1h and then reoxygenation for 24h;besides give Na2S2O4 with 4 mmol/L at different time(5, 15,30 min,1,2 ,4 ,6 h )and then reoxygenatie for 24 h.Biochemical method was used to determine lactate dehydrogenase (LDH) activity. ResultsNa2S2O4 could increase cell apoptosis and the level of lacate dehydrogenase (LDH) the supernatant fluid.ConclusionIt is an effective hypoxia/ reoxygenation mode of using Na2S2O4 in neonatal rat cardiomyocytes. 　　Key words： Myocardial cells; Hypoxia; Reoxygenation ; Cell mode; Na2S2O4 　　心肌缺血/再灌注损伤是临床常见的病理过程，探讨其发病机制并寻找有效的防治措施是目前医学研究领域的一项重要内容。制备离体乳鼠心肌局部缺血/再灌注模型是进行相关研究的常用方法。因此，制备简便易行、稳定可靠的缺血/再灌注模型具有重要的实用价值[1]。鉴于以上原因，本文通过氧耗剂连二亚硫酸钠致心肌缺氧的最佳浓度和时间寻求制备一种稳定简便的心肌缺氧再复氧模型。 　　1 材料与仪器 　　1.1 动物Sprague Dawley 0～2日龄乳鼠15只(华中科技大学同济医科医学院实验动物中心提供，准字号：SCXK 2004-007)。 　　1.2 药品与试剂连二亚硫酸钠(天津市福晨化学试剂厂);3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四唑溴盐即噻唑蓝3-(4,5-dime-thylthiaml-2y1)-2,5-diphenylterazolium bromide，MTT) ( sigma公司;胰酶(1∶250 Amresco公司);胎牛血清 (浙江杭州四季青公司);DMEM培养基(GIBCO);5-溴脱氧尿嘧啶(SIGMA);乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒(南京建成生物工程研究所)。 　　1.3 主要器材ALE-200型电子分析天平(湘仪天平仪器厂);YXJ-1型离心机(SIGMA); CO2 培养箱(HERAEUS);酶标仪(MAGELLAN);CKX41型倒置显微镜(OLYMPUS)。 　　2 方法