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治疗剂量高压氧对胎鼠及新生鼠视网膜血管影响 　 作者：王彦林，肖小敏，丁琦，王雪梨 【摘要】 目的: 探讨临床治疗剂量高压氧（HBO）对胎鼠及新生鼠视网膜的影响. 方法: SD新生大鼠，随机分为实验1～3组、对照组（常压空气组）及ROP模型组各5只，实验1组于孕鼠分娩前单纯予治疗剂量的HBO 5 d（2ATA， 800 mL/L O2，1 h）、实验2组新生大鼠不仅予宫内HBO，且出生后7 d起继续HBO 5 d、实验3组仅予新生鼠7 d HBO（2ATA， 800 mL/L O2，1 h）连续5 d；对照组置于常压空气中；ROP模型组第7 d常压吸氧（800 mL/L）5 d，然后吸空气. 全部新生大鼠于17 d制作视网膜组织切片，计数突破视网膜内界膜的细胞核数目及免疫组织化学方法测定血管内皮生长因子（VEGF）在视网膜的表达. 结果: 实验1～3组突破视网膜内界膜的细胞核数目与对照组相比，差异无统计学意义（Pgt;0.05）,ROP模型组与对照组及实验1～3组相比，差异有统计学意义（37.9±6.1 vs 1.4±0.9, 1.6±1.1, 1.4±0.8, Plt;0.01）. 实验各组及对照组的VEGF的表达均以弱阳性为主，均弱于ROP模型组，差异有统计学意义（Plt;0.01）. 结论: 临床治疗剂量高压氧对胎鼠及新生鼠视网膜无影响. 【关键词】 高压氧 ；早产儿视网膜病；血管内皮生长因子； 视网膜血管 ； 动物模型 0引言 近年来，高压氧作为一种较新的治疗手段走上了围产科治疗的舞台，在胎儿生长受限、胎儿宫内窘迫以及预防新生儿缺血缺氧性脑病等方面颇有疗效［1-2］. 然而治疗剂量的HBO带给组织器官的高氧浓度是否会引起胎儿尚未成熟的视网膜发生氧毒性损伤，导致新生儿发生早产儿视网膜病（retinopathy of prematurity, ROP）一直是国内外担心的问题，目前大多数观点认为HBO治疗对视力无影响，但其结论多仅通过眼科随访获得［1］. 我们通过模拟临床HBO对围产儿的治疗情况，通过计数突破视网膜内界膜的细胞核数目及VEGF的表达来探讨治疗剂量高压氧对胎鼠及新生鼠视网膜的影响. 1材料和方法 1.1材料SD成年雌鼠40只，雄鼠20只，由广东省动物实验中心提供，按2∶1同笼. 每天早晨检查阴道涂片，用沾有生理盐水的棉签取阴道分泌物，涂抹到预先放有生理盐水的载波片上，镜检发现精子，算为孕期的第零天. 选择受孕的20只孕鼠随机分为实验组（HBO组，n=10）和常压空气组（n=10）. 医用多人空气加压舱，型号NG280900，浙江宁波高压氧舱总厂制造. 1.2方法实验组孕鼠于妊娠16 d进入高压氧舱内，置于密闭塑料气囊中，由测氧仪监控气囊内氧浓度达800 mL/L，氧舱压力0.2 MPa(表压)，加压10～15 min，稳压期60 min，缓慢减压10～15 min出舱，其后打开气囊，暴露于正常空气中，每天1次，连续5 d. 常压空气组孕鼠只置于常压空气中. 全部孕鼠于21 d分娩，HBO组母鼠所产新生存活大鼠随机选择10只分配到实验1组（n=5）和实验2组（n=5）. 常压空气组母鼠所产新生存活大鼠随机选择15只分配到实验3组（n=5）、对照组（n=5）及ROP模型组（n=5），期间如有新生鼠死亡，则另外选取妊娠大鼠补充. 实验1,3组新生大鼠于出生7 d起置于HBO下1 h（2ATA，800 mL/L O2），连续5 d后置于常压空气中5 d；实验2组及对照组新生大鼠置于常压空气中. ROP模型组新生大鼠按Smith提供的方法建立ROP模型：将7 d的大鼠先置800 mL/L O2中饲养5 d，然后在空气中继续饲养. 1.2.1视网膜血管计数将各组新生大鼠于出生17 d颈椎脱臼处死，各组5只10只共计50只眼，标记方向并编号，置于40 g/L多聚甲醛中固定24 h以上，常规脱水石蜡包埋，矢状面平行视神经连续6 μm切面，每只眼均匀间断抽取10个切面（有视神经断面的切面不计入在内）雪夫高碘酸苏木素染色，显微镜下计数突破内界膜的血管内皮细胞［3］. 1.2.2视网膜VEGF表达的检测从每组各随机抽取20张未经染色的6 μm视网膜切片，采用EnVisionTM二步法，VEGF兔抗大鼠mAb由北京中山生物工程有限公司提供. VEGF兔抗大鼠mAb工作浓度为:1∶50. 以细胞质着淡黄色至棕褐色颗粒为阳性细胞，阳性染色采用半定量分级，每张切片选取5个不重复的高倍视野（400倍）计算阳性细胞的平均数，阳性细胞≤25%为┼,26%～50%为,51%～74%为,≥75%为. 统计学处理：采用方差分析及LSDt检验比较各组突破视网膜内界膜的细胞核数目，VEGF的表达采用等级资料表示，利用秩和检验