液-质联用选择离子质谱法测定降糖中成药中添加格列本脲含量.docVIP

液-质联用选择离子质谱法测定降糖中成药中添加格列本脲含量 　【摘要】 目的建立液—质联用(LC-MS)选择离子(S[M])法对平糖宝胶囊中格列本脲的含量进行了测定。方法采用岛津VP-ODS (150 L×2.0，6012554) 色谱柱，流动相为0.2%冰乙酸水溶液-乙腈(30∶70)，流速为0. 2 ml / min;柱温为室温。结果格列本脲线性范围为0.868～8.68 ng，回归方程为Y=392 433X-101 195 ，r=0.999 7;平均回收率为97.74%。同时测定了4种降糖中成药中格列本脲的含量。结论该法准确度高，重复性好，可作为本制剂的质控方法。 【关键词】 中成药; 格列本脲; 液-质联用法; 选择离子质谱法 　近年来，一些不法分子擅自在中成药中添加化学药成分，造成快速起效的假象，降糖中成药中非法添加格列本脲的现象也屡见不鲜，由于格列本脲是第2 代磺脲类口服降糖药的代表,其疗效特点为降糖作用强、持续时间长，对肝，肾等器官的毒副作用较大，长期服用会对身体造成极大伤害[1]。因此这种制假行为，应予以严厉打击。 　　目前，对于非法添加格列本脲的测定方法有多种，其中包括气相色谱法，高效液相色谱法等，但是这些方法大多灵敏度较低，选择性不强，而降糖中成药中所添加的格列本脲含量较低，为了检验中成药制剂中是否添加有格列本脲, 有必要建立快速、灵敏、准确、可靠的分析方法。 　　本文采用兼具高分离、高灵敏度的LC-MS联用技术，建立了降糖中成药中非法添加格列本脲的含量测定方法。HPLC-MSn 是研究复杂样品成分分析很有效的方法。可在一级质谱条件下获得很强的待测物准分子离子峰, 几乎不产生碎片离子, 并且可借助MSn ( n= 2～10) 准分子离子进行多级裂解, 进而获得丰富的结构信息。在复杂样品分析中, HPLC-MS具有灵敏度高、专一性强等独特的优势[2～5]。SIM检测法是基于在色谱保留时间范围内选择每个药物原型或其代谢物各自的若干特征离子, 进行选择离子扫描[6]。在选用液-质联用选择离子法的试验条件下格列本脲可与其他干扰成分达到很好的分离，而且最低检出量为0.8 ng。可满足有效测定降糖药中格列本脲的要求。 　　本法准确度高，重复性好，为打击制售假药的违法犯罪行为，净化药品市场，保障人民用药安全提供了有效的技术依据。 　　1 材料 　　1.1 样品来源市售，平糖宝胶囊(批号。 　　1.2 仪器与试药日本岛津液—质联用仪。格列本脲对照品由中国药品生物制品检定所提供;乙腈为色谱纯试剂;冰乙酸为分析纯试剂;水为超纯水。 　　2 方法与结果 　　2.1 液-质联用条件 　　2.1.1 质谱检测模式为电喷雾离子化(ESI)方式，选择性离子检测(S[M])、检测离子为负离子、m/z=492，干燥气流量为10L/min，雾化气流量为1.5 L/min，检测电压为1.5 KV，源电压为4.5 KV，毛细管温度为250℃，干燥气温度为200℃。 　　2.1.2 色谱条件岛津 VP-ODS column (150 mm×2.0，6012554);流动相为0.2%冰醋酸水溶液-乙腈(30∶70);流速为0.2 ml/min;柱温为室温。 　　2.2 试验条件的选择 　　2.2.1 检测方法的选择由于中成药中所添加化学药品的成分含量较低，紫外等检测器的灵敏度较低，使分析很难进行，而质谱检测器兼具高分离和高灵敏度的特点，且检测专属性强，可获得理想的色谱峰，因此采用质谱检测方法进行定量分析，具有较好的准确度。 　　2.2.2 流动相的选择参考文献资料[7]，以0.2%冰醋酸水溶液-乙腈(30∶70)为流动相可使格列本脲与其他成分达到基线分离，且峰形较好，故选择该流动相。 　　2.2.3 提取条件的选择分别考察了甲醇超声提取、甲醇与流动相的混合液超声提取、0.02 mol/L乙酸铵-0.1%乙酸水溶液-乙腈-甲醇(60∶20∶20)超声提取等3种方法对含量的影响。结果见表1。表1 不同提取条件的测定结果 　　2.2.4 提取时间的选择分别考察了超声提取20，30，40 min 3种提取时间对含量的影响。结果见表2。表2 不同提取时间的测定结果 　　2.3 含量测定 　　2.3.1 对照品溶液的制备精密称取格列本脲对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.8 μg格列本脲的溶液，即得。对照品质谱见图1，对照品的LC-MS图谱见图2。图1 格列本脲对照品质谱图　图2 格列本脲对照品LC-MS图谱 　　　2.3.2 供试品溶液的制备 取本品装量差异项下的内容物，研细，取粉末约0.3 g，精密称定，置50 m