温敏性壳聚糖-β甘油磷酸二钠盐水凝胶初步探究.docVIP

温敏性壳聚糖/β甘油磷酸二钠盐水凝胶初步探究 　【摘要】 目的 探讨温敏性壳聚糖/β甘油磷酸二钠盐水凝胶应用于软骨再生的可行性。方法 制备壳聚糖/β-甘油磷酸二钠盐水凝胶。将体外培养的小鼠软骨细胞与水凝胶共培养，采用荧光倒置显微镜观察细胞在三维材料上生长分布的状态。选取共培养1、2周的细胞/水凝胶复合物，采用RTPCR半定量的方法，检测Ⅱ型胶原和聚合素两种细胞外基质在mRNA转录水平上的差异。结果 制备的水凝胶具备生理性的pH值，在常温下为液态，体温状态下为胶冻状。荧光倒置显微镜显示共培养2周时软骨细胞呈球状生长。细胞/水凝胶复合物共培养2周后，Ⅱ型胶原和聚合素的合成增加。结论 壳聚糖/β甘油磷酸二钠盐水凝胶具有温度敏感性，是一种生物相容性的温固化凝胶。 【关键词】 壳聚糖；β甘油磷酸二钠盐； 温度敏感材料 ABSTRACT：Objective To investigate the feasibility of novel thermally sensitive chitosan/β-glycerophosphate (Ch/GP) hydrogel for chondrocytes regeneration. Methods Ch/GP hydrogels were prepared. Fluorescent inverted microscopy (FIM) was used to show the cellular proliferation and threedimensional distribution in the hydrogels. The expression of were collagen type Ⅱ and aggrecan detected with RTPCR. Results These formulations possess a physiological pH and can be held liquid below room temperature for encapsulating living cells; they form monolithic gels at body temperature. FIM shows that at 2 weeks, the cells are generally round. In addition, we found that the normalized ratio of collagen type Ⅱ and aggrecan significantly increased at 2 weeks, as compared to that at 1 week(Plt;0.05). Conclusion This study reports for the first time the use of Ch/GP aqueous solutions as gelling systems, suggesting the discovery of a prototype for a new family of thermosetting gels highly compatible with biological compounds. KEY WORDS：Chitosan; βglycerophosphate; Thermally responsive material 关节炎或者运动损伤造成的关节软骨变性能影响各个年龄层次的身体健康。关节软骨的营养仅来自于关节滑液,无血液、淋巴循环,亦无神经支配,损伤后其自身修复能力较差,关节软骨的缺损修复一直是临床上尚未解决的难题。水凝胶是亲水的聚合物网络,它能够吸收大量的水分,但由于聚合物链间的物理交联和化学交联作用而不会溶解于水中,只能溶涨且保持一定的形状[1]。最低临界温度介于室温和体温之间的温度敏感性水凝胶因其在组织再生[2-4]、细胞传递和细胞治疗[5-8]方面的应用日益受到人们的关注。温度敏感性水凝胶非常适合用于关节软骨再生，因为它高度含水的三维网络结构能够为细胞增殖，迁移和分化提供良好的微环境，并能引导宿主细胞的长入。 最近我们发现用具有相反电荷的多羟基盐例如β甘油磷酸二钠盐（βglycerophosphate，GP)中和后的壳聚糖（chitosan，Ch）具备温度敏感性。这种溶液能够在室温或者低于室温的状态下较长时间的保持液态，当温度上升到37℃，溶胶则转换成凝胶状态，并且其pH值维持在生理范围6.8～7.2。本试验的目的就是研究Ch/GP温固化系统的物理特征，为软骨再生的细胞治疗的可行性提供理论依据。 1 材料与方法 1.1 材料 壳聚糖（高分子量，脱乙酰度