温胃饮对脾胃虚寒型胃溃疡大鼠内分泌水平影响实验探究.docVIP

温胃饮对脾胃虚寒型胃溃疡大鼠内分泌水平影响实验探究 　【摘要】 目的：通过实验性脾胃虚寒胃溃疡大鼠模型，研究温胃饮对脾胃虚寒型胃溃疡内分泌水平的影响机理。方法：采用放射免疫法观察温胃饮对实验性脾胃虚寒胃溃疡大鼠模型溃疡愈合时血清一氧化氮(NO)、一氧化氮合成酶(NOS)、胃泌素(GAS)、胃动素(MTL)等内分泌水平的影响。结果:与模型组相比，温胃饮治疗组和雷尼替丁组均可降低血清NO、NOS、GAS水平，提高血清MTL水平(Plt;0.01)，温胃饮大剂量组与雷尼替丁组相比差异有显著性意义(Plt;0.05)。结论：温胃饮可能通过降低血清NO、NOS、GAS，提高MTL水平，而减少粘膜攻击因子和增强胃粘膜保护而发挥抗溃疡作用。 【关键词】 温胃饮 胃溃疡 NO NOS GAS MTL 本文采用放射免疫方法观察我院中医科研制的温胃饮对实验性脾胃虚寒胃溃疡大鼠模型溃疡愈合时血清一氧化氮(NO)、一氧化氮合成酶(NOS)、胃泌素(GAS)、胃动素(MTL)等内分泌水平的影响，探讨其治疗脾胃虚寒型胃溃疡的作用机理。 1 实验材料 1.1 动物健康、成年Wistar大鼠50只，体重为200±20g，雌雄各半，由吉林大学基础医学院实验动物室提供。 1.2 药物温胃饮药物组成：桂枝、藿香、苏梗、厚朴、陈皮、半夏、木香、砂仁、蒲黄、佩兰、五灵脂、甘草。煎剂由吉林大学中医科制药室提供，每剂为100mL，成人用量每日2次，每次1剂，温水送服；雷尼替丁胶囊0.2g/粒(江苏晨牌药业有限公司出品,批号061204)。 1.3 试剂 NO、NOS、GAS、MTL放免试剂盒(南京建成生物工程研究所提供)。 1.4 仪器 UV754分光光度仪(上海精密仪器有限公司)；FJ2003/50pγ放射免疫计数器(国营二六二厂)。 2 实验方法 2.1 分组及模型制备 将大鼠按性别、体重随机分为5组:空白组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组、雷尼替丁组，每组10只。首先建立脾胃虚寒型大鼠模型。参照改良苦寒泻下法［1］，除空白对照组外其它4组以200%大黄煎剂按2ml/100g体重进行灌胃，每日3次。从投药前一天起,对其一般状况(活动，毛色光泽，大便成形)逐日进行目视观察并记录，并隔日进行体重测定，共8d。根据观测结果结合参考文献确认脾胃虚寒模型造模成功后，第9d禁食，自由饮水1d。第10d采用改良后的Okabe乙酸涂抹法，用3%戊巴比妥钠0.1ml/100g，腹腔注射麻醉，将大鼠仰卧位固定于手术台上，沿剑突下至脐上剪尽毛约50mm×40mm，常规消毒，沿腹中线打开腹腔约2～3cm，将胃轻轻分离出，置于无菌玻片上，术者一手固定玻片，一手捏紧内径为4mm无底无菌的玻璃圆管,垂直的将一端管口压紧在胃前壁胃小弯角切迹下方约5mm处的浆膜面上，向玻璃管内注入100%乙酸0.1ml，持续60s后用细棉签将玻管内乙酸吸干，移开玻管，可见注酸部位颜色苍白，以蘸生理盐水的棉签轻轻抹洗2次；然后轻轻牵拉大网膜覆盖乙酸涂抹面，将胃还纳入腹腔内，缝合腹壁，消毒伤口。 　　术后当日饲水，次日起分别给予相应的药物灌胃：大鼠用药计量按动物体表面积以成人用量每日200ml折合，100g大鼠每日用量为成人剂量的0.018倍，温胃饮高剂量组每日量3.6ml/100g，低剂量组减半；雷尼替丁胶囊,用蒸馏水配成浓度为0.3g/100ml混悬液，治疗组均按1ml/100g体重灌胃，早晚各1次。 2.2 标本采集及处理 灌胃至第24d停药，各组大鼠禁食24h，断头处死取血,静置2～3h后分离血清，置EP管中,20℃冰箱保存待测；剪开大鼠腹腔,分别结扎贲门、幽门端后取出胃，沿胃大弯剪开，冰生理盐水冲洗，以溃疡瘢痕平行于胃长轴方向的最长径为中心取材，迅速置于10%中性甲醛中固定24h。 2.3 检测指标及方法 2.3.1 粘膜损伤指数及溃疡抑制率 按改良Guth标准［2］测定计算胃粘膜损伤指数：病变lt;1mm为1分，1-2mm为2分，2-3mm为3分，3-4mm为4分，＞4mm者将其分成若干段，每段按上法计分，全胃得分为粘膜损伤指数。溃疡抑制率按下述公式计算：溃疡抑制率=(模型对照组平均溃疡指数-实验组平均溃疡指数)/模型对照组平均溃疡指数×100%。 2.3.2 血清NO、NOS、GAS、MTL的测定 采用放射免疫法，严格按试剂盒说明书步骤操作。 　 2.4 统计方法 应用SPSS12.0软件数据统计包，各组数据以均数±标准差(±s)表示，各组进行方差齐性检验，方差齐进行成组设计两样本均数t检验，方差不齐进行t检验。 3 实验结果 3.1 温胃饮对实验性脾胃虚寒型胃溃疡大鼠胃粘膜损伤指数和溃疡抑制率的影响结果，见表1。表1 各组大鼠胃粘膜损伤指数测定结果比较 3.2 温