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激活素A刺激肾小管上皮细胞转分化探究 　【摘要】 目的 研究激活素A对体外培养的人肾小管上皮细胞转分化的影响。方法 取人肾小管上皮细胞株进行体外培养，分别向培养液中加入激活素A或激活素A+卵泡抑素，应用免疫组化法检测培养细胞转化生长因子β蛋白(TGF-β)的表达，以观察肾小管上皮细胞转分化的情况。结果 与对照组和卵泡抑素组相比，激活素组肾小管上皮细胞表达的TGF-β蛋白显著增多。结论 激活素A能促进肾小管上皮细胞增殖、转分化，提示激活素A可能在肾小管间质纤维化中起重要作用。 【关键词】 激活素A; 卵泡抑素;肾小管上皮细胞;转化生长因子β蛋白 　　Abstract Objective To study the stimulating effect of activin A on the transdifferentiation of renal tubule epithelial cells cultured in vitro.Methods Renal tubule epithelial cell strains were cultured in vitro; activin A or activin A plus follistatin were added into the culture solution and immunohisochemical method was applied in detecting the expression of transforming growth factorβ(TGF-β) protein in the cultured cells and the transdifferentiation of renal tubule epithelial cells was observed. Result The TGF-βprotein expressed by renal tubule epithelial cells in activin A group increased much more than that in control group or in follistatin group.Conclusions Activin A can promote the proliferation and transdifferentiation of renal tubule cells, which suggests that activin A may play an important role in interstitial fibrosis of renal tubule. 　　KEYWORDS activin A follistatin renal tubule epithelial cells TGF-βprotein 　　激活素A(activin，ACT)是由性腺分泌的肽类激素，是近年来发现的重要细胞因子，具有广泛的生物学活性[1]。ACT分泌病理性地增高或降低，可以导致组织细胞分化、增生、代谢异常[2-3]。卵泡抑素(follistatin,FS) 也是由性腺分泌的糖蛋白激素,可阻断ACT 的生物学效应。ACT和FS形成体内一对天然的拮抗体，共同调节组织细胞的分化，同样，其在肾脏细胞的分化中也具有显著调控作用。故本实验观察ACT对人肾小管上皮细胞增殖、转分化的影响，探讨ACT在肾小管纤维化中的作用，为阐明肾组织纤维化的发病机制，探讨防治方法提供新的实验依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 细胞 人近端肾小管上皮细胞株(HK2，购自中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所)。 　　1.1.2 主要试剂 DMEM/F12培养基(DF，Hyclone公司)，重组人激活素A(ACT-A)、卵泡抑素(FS)，(美国Peprotech公司)，胎牛血清(FCS，Gibco公司)，胰蛋白酶(Gibco公司)，小鼠抗转化生长因子β蛋白单抗工作液(TGF-β)、SP免疫组化试剂盒、DAB显色试剂盒(北京中杉生物技术公司)。 　　1.2 方法 　　1.2.1 细胞培养及传代 取HK2细胞株，加入含15%FCS的DF培养基，吹打后以105/ml的细胞含量接种于细胞培养瓶中，37℃、5%CO2条件下培养，3天后换液。倒置显微镜观察，待细胞融合生长为单层后，0.25%胰蛋白酶与0.02%EDTA1:1混合后消化、1：2传代，传至3～5代取细胞行各指标检测。 　　1.2.2 细胞增殖检测 消化指数生长期HK2细胞，调细胞密度为1×104/ml,接种于96孔平底培养板上,37℃、5% CO2条件