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牡丹根提取液抗氧化作用探究 　 作者：黄海霞，付强，陈晓，常圣鑫，张晓彤，刘美佳 【摘要】 目的为开发牡丹在天然抗氧化剂和医药保健等相关领域的应用提供一定的理论和实验基础。方法以洛阳红、状元红、凤丹白和乌龙捧盛4个品种牡丹根为材料，研究了95%乙醇提取物在α,α-二苯-β-苦味肼(DPPH)自由基体系、卵黄脂蛋白不饱和脂肪酸(PUFA)体系、邻苯三酚自氧化体系中的抗氧化活性，对比分析不同品种牡丹的抗氧化效果。结果不同品种牡丹根提取液均具有较强的清除DPPH自由基的能力，对卵黄脂蛋白PUFA过氧化和邻苯三酚自氧化也具有一定的抑制作用，且随着提取液浓度的升高抗氧化效果越好。结论牡丹根提取液有较好的抗氧化能力，具有一定的药用价值。 【关键词】 牡丹; 抗氧化能力; α,α-二苯-β-苦味肼自由基; 不饱和脂肪酸; 邻苯三酚 丹皮是毛茛科芍药属植物牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的根皮。丹皮味苦辛，性凉，富含丹皮酚等多种生物活性物质，有清热、凉血、镇痛和消瘀等功效。 近年来，随着对牡丹研究的不断深入，大量研究表明它还有抗炎、抗衰老及保肝、保护心脏、抗肿瘤的作用，具有良好的药理活性[1]。目前，牡丹根皮正作为一种传统中药被日益重视，并在医药、香料、化学等领域广泛开发。本研究以洛阳牡丹品种为研究对象，采用有机溶剂法提取牡丹根皮中的活性成分，运用多种分析方法探讨牡丹根醇提液的抗氧化能力，对比分析不同浓度醇提液的抗氧化作用效果，为天然抗氧化剂的研究和应用奠定一定的理论和实验基础。 　　1 材料 　　洛阳红、状元红、凤丹白、乌龙捧盛4个牡丹品种约3～5年的根，于2007-11中旬采自洛阳国际牡丹园。将牡丹根洗净后抽去其髓部，置于烘箱内30℃烘干，用粉碎机将其磨成粉末，过40目金属筛，置入棕色广口瓶中保存备用。 　　2 方法 　　2.1 提取液的制备准确称取牡丹根皮粉末2.00 g置入干燥的三角瓶中，加5.00 ml 95%乙醇，摇匀，密封后40℃恒温振荡水浴提取2h。然后转移至离心管中，4 000 r/min离心10 min，收集上清液于4℃下冰箱保存备用。 　　2.2 牡丹根提取液抗氧化能力的测定 　　2.2.1 DPPH法[2]测定牡丹根提取液的抗氧化能力精确移取不同浓度稀释液2.00 ml 于试管中，再加入2.00 ml 2×10-4 mol/L DPPH溶液，摇匀，室温放置30 min，测定A517，即为A样品(用2.00 ml乙醇与2.00 ml样品溶液混匀后调零，以排除试样本身颜色的影响)。向2.00 ml 乙醇中加入2.00 ml DPPH溶液，测定A517，即为A对照。 　　根据公式得样品清除率η： 　　清除率η(%)=(A对照-A样品)/A对照×100% 　　2.2.2 AOA法[3]测定牡丹根提取液的抗氧化能力 建立以Fe2+诱导卵黄脂蛋白多不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应为模型。精确移取1∶25稀释的卵黄悬液(卵黄用等体积pH 7.45，0.2 mol/L PBS配成，使用前用磁力搅拌器搅拌10 min)0.20 ml，不同浓度的提取液0.10 ml、25 mmol/L FeCl2溶液(现配现用)0.20 ml，用PBS补足2.00 ml，即为样品管。对照管除不加样液外其它试剂同前。将上述两种试管同时置于37℃水浴中振荡5 h，取出后，加入质量分数为20% TCA 0.50 ml终止反应，静置10 min后，3 500 r/min离心10 min;取2.00 ml上清液，加入质量分数为0.8% TBA溶液1.00 ml，沸水浴15 min，冷却，测定A532(用pH 7.45 PBS调零)。样品抗卵黄脂蛋白PUFA过氧化的抑制率： 　　抑制率(%)=(A对照-A样品)/A对照×100% 　　2.2.3 邻苯三酚自氧化法[4]测定牡丹根提取液的抗氧化能力取50 mmol/L pH 8.2 Tris-HC1缓冲液4.50 ml加0.10 ml不同浓度的提取液，于25℃保温10 min;加入25℃预温的5 mmol/L邻苯三酚0.20 ml，混匀后迅速测定A327(以等体积10 mmol/L HC1代替邻苯三酚溶液为空白调零，对照组以等体积甲醇代替样液)，每隔10 s测定1次，连续测定150 s。作吸光度随时间变化曲线的回归方程，其斜率为邻苯三酚的自氧化速率V，按下式计算样品对O2-·的抑制率。 　　抑制率(%)=(V对照-V样品)/V对照×100% 　　式中：V对照—对照组邻苯三酚自氧化速率(△A/s) 　　V样品—样品组邻苯三酚自氧化速率(△A/s) 　　3 结果 　　3.1 牡丹根提取液清除DPPH自由基的能力利用DPPH的褪色效应，测定波长为517 nm处吸光度值的下降计算不同浓度牡丹提取液对DP