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电针对非酒精性脂肪肝肝细胞色素P450 2E1表达及氧化抗氧化影响 　 作者：曾志华，冯雯琪，卓廉士 【摘要】 目的： 研究电针对非酒精性脂肪肝(NAFLD）肝细胞色素P450 2E1(CYP2E1)表达及氧化抗氧化的影响. 方法： 用高脂饲料诱导大鼠脂肪肝模型，同时给予电针治疗，观察肝组织病理形态的变化和肝CYP2E1表达. 测定肝内丙二醛（MDA），超氧化物歧化酶（SOD），甘油三酯(TG)，总胆固醇(TC)以及谷胱甘肽（GSH）含量的变化. 结果： 与脂肪肝模型组比较，电针组的肝组织脂肪变性和炎性损伤得以改善. 免疫组化证明电针治疗能抑制脂肪肝肝细胞色素CYP 2E1的表达，同时肝内MDA，TG，TC显著降低(Plt;0.01)，SOD，GSH活性升高(Plt;0.01). 结论： 电针通过抑制脂肪肝细胞色素CYP 2E1的表达，从而减轻脂质过氧化反应，增强抗氧化能力，使肝组织的脂肪变性和炎性损伤得以改善. 【关键词】 非酒精性脂肪肝；肝细胞色素P450 2E1；氧化抗氧化；针灸治疗 0引言 随着国人生活水平提高，饮食结构变化，近年来由肥胖、高脂血症、糖尿病、营养失调等引起的NAFLD发病率呈上升趋势［1］. 研究表明［2-3］，NAFLD不再是一种良性及静止的病变，它可影响肝功能，易发展为脂肪性肝炎，长期的肝内脂肪蓄积可促进肝纤维化的发生直至肝硬化，甚至肝功能衰竭. 近年来，临床上常用针刺的方法防治NAFLD，安全有效，却鲜有实验方面对此作用机制的研究. 有研究表明［4］，肝细胞色素CYP2E1（liver cytochrome P450 2E1）在NAFLD的发病机制中主要参与脂质过氧化反应，对NAFLD的发生及发展起着重要作用. 据此，本研究采用高脂饲料诱导大鼠NAFLD模型，施以电针“治疗”，观测肝CYP2E1的表达和脂质过氧化反应的变化，现将结果报告如下. 1材料和方法 1.1材料雄性SD大鼠（重庆医科大学动物中心提供）；CYP2E1抗体，即用型SABC免疫组化染色试剂盒，DAB显色试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司）；丙二醛（MDA），超氧化物歧化酶（SOD），谷胱甘肽（GSH），甘油三脂（TG），总胆固醇（TC）试剂盒为南京建成生物工程研究所提供. 1.2方法 1.2.1分组与造模雄性SD大鼠33只,体质量（170±20） mg，适应性饲养3 d后，标记后随机分为正常对照组（11只）和造模组（22只）. 造模采用陈世清造模法［5］，即喂养由100 g/L猪油、20 g/L胆固醇和880 g/L普通饲料混合而成的高脂饲料. 8 wk后随机断颈处死正常对照组大鼠1只和造模组大鼠2只，取出大鼠肝脏，取肝左叶， 40 g/L甲醛固定，常规石蜡包埋、切片，苏木精伊红染色，光镜下观察，计算机彩色图像系统成相，以验明造模情况. 将余下的造模组大鼠20只再予标记，再随机分为2组：NAFLD模型组10只；电针治疗组10只. 1.2.2电针治疗将造模成功的实验性肥胖大鼠随机分为两组，一组不做任何治疗，为模型组(n=10)；一组给予电针治疗，为电针组(n=10). 根据化痰利湿、活血化瘀的治则，取“丰隆”、“足三里”、“太冲”、“三阴交”穴. 针刺方法：置大鼠于“大鼠固定器中”（自制）中， 取一侧之上述诸穴，用32#毫针，分别剌入1 ~7 mm. 然后接通电针综合治疗仪（重庆医疗器械厂制造），采用频率10 Hz，强度1.5 V连续波，以下肢轻微抖动为宜，保持大鼠清醒状态，１次／d ，每次15 min，连续“治疗” 4 wk，左右侧穴间日轮换. 治疗期间，模型组之大鼠亦将分别置入固定器中15 min，连续4 wk. 大鼠腧穴据《实验针灸学》定位［6］. 正常组始终喂基础饲料,模型组和电针组继续饲以高脂饲料. 1.2.3肝脏生化指标测定取大鼠之肝右叶，4℃下制成9 g/L的生理盐水肝匀浆液，3000 r/min离心10 min离心取上清液，按试剂盒说明书操作测定MDA，SOD，GSH，TC和TG. 1.2.4病理学及免疫组化检查取大鼠肝左叶，40 g/L甲醛固定后作常规HE染色，观察肝组织的脂肪变程度. CYP2E1免疫组化染色，采用链霉素抗生物素蛋白过氧化酶免疫组化法(SP)法，DAB显色，一抗CYP2E1的工作浓度为1∶100，操作流程按试剂盒说明书进行. 每次实验均设阴性对照，以PBS替代一抗. CYP2E1免疫组化显示棕黄色颗粒为阳性，每张切片最少20个高倍视野观察棕黄色颗粒的染色程度，用IPP5.1免疫组化分析软件对图片阳性区域进行累积光密度值（IOD）量化测定. 统计学处理： 采用SPSS 12.0软件， 数据结果用x±s表示，组与组之间比较采用方差分析(ANOVA)中的LSD法，Plt;0.