破血化瘀药三棱、莪术对肺纤维化大鼠模型肺形态学及羟脯氨酸影.doc

破血化瘀药三棱、莪术对肺纤维化大鼠模型肺形态学及羟脯氨酸影 　【摘要】 观察破血化瘀药三棱、莪术对肺纤维化大鼠模型的肺形态学及羟脯氨酸(HYP)的影响,探讨其作用机制。方法大鼠气管内注入博来霉素(5 mg/kg)造模。随机分为空白对照组、生理盐水组、三棱莪术高剂量组(l g/mL)、低剂量组(0.5 g/mL)及泼尼松组(15 mg/kg),造模次日起每天给药,于第7 d处死大鼠,观察肺间质纤维化病理变化及肺组织HYP的含量。结果生理盐水组HE染色肺泡间隔增厚,大量炎性细胞浸润,Masson染色肺间质内成纤维细胞增多,形成肺实变;其余给药组肺组织炎性细胞浸润较前者为轻,成纤维细胞明显较少。与生理盐水组比较,三棱莪术高剂量组及泼尼松组肺组织HYP含量显著降低(Plt;0.01,Plt;0.05)。结论三棱、莪术能有效抑制博来霉素引起的肺纤维化形成。 【关键词】 三棱 莪术 博来霉素 肺纤维化 羟脯氨酸 疾病模型 动物 肺纤维化形成早期为肺泡炎,后出现胶原沉积,最终发展为弥漫性肺纤维化,是呼吸衰竭的重要原因,其发病机制尚不清楚,目前缺乏特效药。中医认为本病的病理机制主要是瘀血与痰浊互相胶结,共同形成弥漫性肺间质纤维化的病理产物,而“瘀”贯穿了整个过程,近年来中医药对其治疗及实验研究多以活血化瘀为原则。三棱、莪术为破血化瘀的代表药物,《衷中参西录》曰:“三棱气味俱淡,微有辛意;莪术味微苦,亦微有辛意,性皆微温,为化瘀血之要药。以治男子痃癖﹑女子癥瘕,月闭不通,……又能治心腹疼痛,胁下胀疼,一切血凝气滞之症。”[1]两药配合运用,能使两者破血化瘀的功效大大增强,而超过两者功效之和,属于中药中特殊的“相须”配伍关系[2]。笔者选用三棱、莪术对实验性肺纤维化大鼠进行干预,探讨其抗肺纤维化的作用机制。 1材料与方法 1.1材料 1.1.1动物及分组清洁级Wister大鼠50只,雄性,体质量(200±20)g,福建医科大学实验动物中心提供[合格证:SCXK(闽)20040002],随机分为5组,每组10只,分别为三棱莪术高剂量组、三棱莪术低剂量组、泼尼松组、生理盐水组及空白对照组。 1.1.2药品注射用盐酸博来霉素(天津太河制药有限公司,批号:050102)每支8 mg,用时加生理盐水4 mL溶解。醋酸泼尼松(浙江江琚精药股份有限公司,批号:050230),每片20 mg,用时研粉,加蒸馏水溶解配成浓度35%溶液。羟脯氨酸(HYP)试剂盒(南京建成生物工程研究所)。氯化钠注射液(福州海王福药制药有限公司,批号:041227A04)。乙醇、PBS等试剂均为分析纯。药材三棱、莪术购自福建中医学院国医堂,取三棱、莪术(1∶1)适量,加水浸泡1 h,煎煮2次,每次1 h,合并滤液并浓缩成含生药1 g/mL备用。 1.2方法 1.2.1肺纤维化造模参照文献[3],以戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔注射麻醉,仰卧,纵向切开皮肤,钝拨分离暴露气管,用4号针头刺入气管,尽量接近气管分叉处,将博来霉素(5 mg/kg)缓慢滴入,立即将动物直立旋转,使药液在肺内均匀分布,缝合皮肤,局部消毒防止感染。 1.2.2给药造模后隔天开始给药,三棱莪术高剂量组(l g/mL),低剂量组(0.5 g/mL),泼尼松组(15 mg/kg),生理盐水组,每天1次,每次给药10 mL/kg。空白对照组胃内灌注等体积生理盐水。 1.2.3标本收集大鼠于给药后第7 d处死,迅速开胸,取出肺脏,切下右肺测定肺组织HYP;左肺以10％福尔马林液灌注后投入福尔马林液固定,外侧矢状面取材,常规切片,HE和Masson染色,观察肺组织形态变化。 1.2.4形态学改变分级肺泡炎和肺纤维化分级按文献[4],将肺泡炎和肺纤维化的程度分为4级:0级无明显改变;1级轻度改变,病变范围小于全肺的20％;2级中度改变,病变范围占全肺的20％~50％;3级重度改变,病变范围占全肺的50％以上。 1.2.5HYP测定精确称取肺组织湿质量约100 mg,置于试管中,按试剂盒说明书操作。计算HYP含量公式: HYP(μg/mL)= (测定管吸光度－空白管吸光度)×标准管浓度(标准管吸光度－空白管吸光度)×(5 μg/mL)×稀释倍数 1.3统计学处理各组数据应用SPSS 11.5进行方差分析,并进行两两比较。 2结果 2.1肺形态学改变 2.1.1肺大体形态空白对照组双肺表面光滑,弹性良好,未见明显变化;生理盐水组双肺体积增大,出现点状出血点,灶状瘀斑;另3组肺体积均轻 度增大,均出现散在的点状出血点,偶见灶状瘀斑。 　 2.2.2光镜观察空白对照组肺结构清晰,未见明显变化;生理盐水组肺泡间隔增厚,大量炎性细胞浸润,间质内成纤维细胞增多;三棱莪术高剂量组与生理盐水组比较,