肝癌细胞系MHCC97亚群中甲胎蛋白表达差异.docVIP

肝癌细胞系MHCC97亚群中甲胎蛋白表达差异 　 作者：张宁，窦科峰，李韧，樊菁，张福琴 【关键词】 ,肝细胞癌；甲胎蛋白；边缘群；异质性 【Abstract】 AIM: To explore the expression characteristics of alphafetoprotein (AFP) in different subpopulations of MHCC97 cell lines of human hepatocellular carcinoma (HCC). METHODS: Side population (SP) cells and nonSP cells were telled using FACS analysis according to the ability of these cells to extrude the Hoechst 33342 dye. Immunocytochemical staining was performed to show the expression of AFP in SP and nonSP cells. RESULTS: With the Hoechst 33342 extrusion assay, SP cells were found to account for 1.8% of the MHCC97 cells， and AFP was much more expressed in SP cells than in nonSP cells. CONCLUSION: The differential expression of AFP can be seen in MHCC97 cell lines，and most AFP positive cells are from SP cells, indicating HCC is heterogeneous. 【Keywords】 hepatocellular carcinoma；alphafetoprotein； side population；heterogeneity 【摘要】 目的：探讨甲胎蛋白（AFP）在不同肝癌细胞亚群中的表达差异. 方法：应用流式细胞荧光激活分选法将肝癌细胞分成边缘群（SP）及非边缘群(NonSP) 2个细胞亚群，采用免疫细胞化学方法观察AFP在2个不同肝癌亚群中的表达变化及含量. 结果：SP细胞仅占细胞总体的1.8%，SP细胞AFP表达明显高于NonSP细胞（Plt;0.01）. 结论：AFP在肝癌细胞中表达有差异，强阳性多数分布在SP细胞亚群中，进一步证实了肿瘤的异质性. 【关键词】 肝细胞癌；甲胎蛋白；边缘群；异质性 0引言 病理学很早就证实，AFP在肝癌组织中的表达具有显著的异质性（heterogeneity），但对AFP这种异质性的分布规律及意义存在较大的争议. AFP在肝癌组织中的差异表达有可能反映了肝癌组织中不同癌细胞在分化程度上的差异. 近年来，利用流式细胞荧光激活分选法可以获得组织中具有原始干细胞特征的成体细胞［1-2］，利用类似的方法可以将肝癌细胞分成两个不同特征的亚群［3］，因此，探讨AFP在这两个不同亚群肝癌细胞中的表达差异对阐明和验证肝癌组织中是否存在具有干细胞特征的肿瘤细胞具有重要的意义. 1材料和方法 1.1材料MHCC97细胞系(人高转移肝癌细胞系)购自上海复旦大学中山医院肝癌研究所. 免疫组化试剂盒及DAB显色试剂盒（中杉金桥）、FACS Advantage II型六色荧光流式细胞仪（美国BD公司）、BX51免疫荧光显微镜及DP70数字图像摄影系统（Olympus公司）. 1.2方法 1.2.1边缘群(SP)细胞及非边缘群(NonSP)细胞的检测①细胞染色：MHCC97细胞常规消化，HBSS洗涤，制备成单细胞悬液，细胞密度为1×109/L. 等分细胞悬液，两组均加入荧光染料Hoechst 33342使终浓度为6 mg/L，其中一组再加入维拉帕米，终浓度50 mmol/L. 37℃避光水浴90 min，冰上10 min终止染色，冰预冷HBSS洗涤细胞并重悬浮. 再加入PI使终浓度为2 mg/L. ②流式细胞仪检测：355 nm UV激发光源，610 nm双色短通反射滤镜，450 nm和675 nm边缘长通滤片分别检测散射光蓝光及红光部分，线性模式采集信号. 测量前向散射和侧向散射二维参数图，检测细胞均一性，以Hoechst red为X轴，Hoechst blue为Y轴作二维散点图，将低Hoechst red及低Hoechst blue且维拉帕米组缺失的区域设定为SP细胞的“门”（gate），计算百分比. 分选出SP细胞及