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肺气肿肺气虚证模型大鼠血液流变学实验探究 　 作者：刘向国，方志斌，蔡圣荣，王元勋 　摘 要：目的：观察肺气肿肺气虚证模型大鼠血液流变学的变化，探讨其在肺气肿肺气虚证发病中的作用机制。方法：将90只SD大鼠随机分为对照1个月、2个月、3个月组和模型 1个月、2个月、3个月组，采用气管内注入脂多糖(LPS)和烟熏双因素复合制作肺气肿肺气虚证大鼠模型，观察模型大鼠血液流变学的变化。结果：与对照组相比，模型组大鼠动脉血全血黏度(高切、低切)、血浆黏度、红细胞压积、红细胞聚集指数及纤维蛋白原均升高。结论：肺气肿肺气虚证模型大鼠血液存在高黏、高浓、高聚的流变特性。 　　关键词：肺气肿；肺气虚证；血液流变学 　　肺气虚证是中医的一个常见证候，是以肺功能减退为主要特征的全身多系统功能衰退综合征。研究发现，肺气虚证是肺气肿最常见的证型，它直接影响肺气肿的发生和发展，贯穿于肺气肿的整个病程之中[1]，且肺气的盛衰与肺气肿病情轻重一致。本研究通过对肺气肿肺气虚证模型大鼠血液流变学变化的观察，探讨其在肺气肿肺气虚证发病中的作用机制，为肺气肿肺气虚证动物模型客观化、标准化评价及肺气虚证本质的研究提供实验依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物与分组 　　健康SD大鼠90只，雌雄各半，体质量200~250 g（由安徽省全椒安立实验动物有限公司提供），随机分为对照1个月、2个月、3个月组，每组10只；模型1个月、2个月、3个月组，每组20只。 　　1.2 仪器与试剂 　　MDK3200 K双通道全自动血流变仪：重庆麦迪克科技开发有限公司；脂多糖(LPS)：美国Sigma公司；造模用香烟：合肥卷烟厂生产合肥牌过滤嘴香烟，焦油含量15 mg/支，尼古丁含量1.3 mg/支。 　　1.3 肺气肿肺气虚证大鼠模型及对照组的制作 　　模型制作根据参考文献[2]、[3]、[4]中的方法，按以下步骤进行：（1）LPS气管内注入：于实验第1 d和第14 d，用乙醚吸入法麻醉大鼠后，将大鼠固定于鼠板上，修剪颈部皮毛，消毒，切开颈部皮肤，钝性分离皮下组织及胸骨舌骨肌，暴露气管，用1 mL注射器抽吸LPS (1 mg/mL)200 μL，针头刺入气管后将LPS注入，并注入少量空气以保证LPS全部进入气管，立即将鼠板竖起并适度摇动，使LPS分布尽可能均匀，在切口局部滴入庆大霉素注射液，然后缝合皮肤并用碘酒棉球消毒。（2）烟熏：LPS气管内注入的次日，将大鼠分批置于1 m3的烟室中，用锯末50 g加10支香烟烟丝混合点燃烟熏，每日烟熏30 min。对照组于实验第1 d和第14 d，按照与模型组相同的手术方法进行操作，往气管内注入等量生理盐水。手术次日，将大鼠置于无烟熏同样环境中饲养。 　　1.4 取材及切片 　　每组大鼠分别于1个月、2个月、3个月造模成功后取右下肺和肺门组织置于10 %甲醛中固定，常规冲洗、脱水、透明、浸蜡、包埋，连续5 μm厚切片、HE染色、中性树胶封片，在光镜下观察肺组织形态学变化并摄片。 　　2 结果 　　2.1 症状与体征 　　模型组大鼠造模15 d后先后出现精神萎靡，蜷伏少动，反应迟钝；毛失光泽、发黄、易脱落；咳嗽，气急，有些有呼吸道分泌物从口鼻流出，偶可闻及气道痰鸣音。上述症状与体征从1个月至3个月逐渐加重。对照组始终未出现上述症状与体征。 　　2.2 肺组织形态学观察 　　2.2.1 大体观察 　　与同时段对照组相比，肉眼见各时段模型组大鼠肺体积增大，肺边缘变钝，质软，弹性较对照组略低，且以3个月组最为明显。 　　　2.2.2 光镜观察 　　①对照组：大鼠支气管黏膜结构和肺组织结构清晰,支气管黏膜上皮排列整齐，纤毛明显可见。无支气管管腔扩张、上皮坏死脱落、纤毛脱失、炎细胞浸润等病理改变；肺泡壁无明显增厚，肺泡腔干净、匀称(见图1)。②模型组：1个月模型组大鼠细支气管壁有慢性炎性细胞轻度浸润(见图2)。2个月模型组大鼠细支气管壁有慢性炎性细胞轻至中度浸润(见图3)。3个月模型组大鼠呼吸性细支气管及肺泡管、肺泡囊扩张，其周围的肺泡间隔变薄或断裂，扩张成大小不等的囊泡，部分呼吸细支气管及肺泡管扩张呈不规则气腔，部分肺泡相互融合形成肺大泡，细支气管壁有慢性炎性细胞重度浸润，黏膜层内有杯状细胞增生，纤毛上皮破损、坏死、脱落、纤毛减少(见图4、图5)。 　　2.3 血液流变学变化 　　见表1。 　　图1 对照组正常肺组织（HE染色，×100）（略） 　　图2 1个月模型组肺组织（HE染色，×200）（略） 　　图3 2个月模型组肺组织（HE染色，×200）（略） 　　图4 3个月模型组肺组织（HE染色，×400）（略） 　　图5 3个月模型组肺组织（HE染色，×200）（略） 　　表1 各组大鼠血液流变学变化（略） 　　注：模型组与同时段对照组相比