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胎盘免疫调节因子对CIK细胞活性影响 　 作者：蒙怡, 舒雨雁, 张学荣, 宋慧, 刘海涛 毕业论文 【关键词】; 胎盘免疫调节因子;,细胞因子诱导的杀伤细胞;,细胞毒作用;,淋巴细胞增殖 毕业论文 　　[摘 要]; 目的: 探讨胎盘免疫调节因子（placental factor, PF）对细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokineinduced killer cells, CIK)的增殖及CIK细胞杀伤活性的影响。方法: 抽取健康人新鲜血液, 诱导CIK细胞产生后, 设加入不同浓度的PFCIK组和不加PF的空白CIK组, 观察CIK细胞的增殖率和细胞毒活性的变化。结果: 与不加PF的空白CIK细胞相比较, 加不同浓度的PF组CIK细胞的增殖率和杀伤率均有统计学差异（Plt;0.01）。结论: PF可上调节CIK细胞的生长及杀伤活性, 为CIK细胞的过继性免疫治疗提供了一种新的方法。 毕业论文 　　[关键词]胎盘免疫调节因子; 细胞因子诱导的杀伤细胞; 细胞毒作用; 淋巴细胞增殖 毕业论文 　　胎盘免疫调节因子( placental factor, PF), 即胎盘肽, 是从健康孕妇足月分娩的胎盘中分离提取的小分子多肽及核酸为主的混合物质, 其相对分子质量(Mr)为3800～5000, 呈淡黄色透明液体[1]。近年临床使用中发现, PF 能提高机体的免疫功能, 具有良好的免疫调节和免疫增强作用[2], 能抑制肿瘤生长和抗突变, 促进淋巴细胞上绵羊红细胞受体恢复, 促进T细胞增殖、 分化和成熟并增强其活性。但迄今尚未有关于PF对细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）功能的影响的报道, 为此, 本实验中探讨了PF对CIK细胞增殖及杀伤活性的影响。 毕业论文 　　1; 材料和方法 毕业论文 　　1.1; 材料; 重组人IFNγ和IL1α为Peprotech公司产品。重组人IL2和抗人CD3单克隆抗体（mAb）为北京远策药业有限公司产品。PHA、 RPMI1640培养基干粉为美国GIBCOBRL公司产品。胎牛血清和人淋巴细胞分离液为天津TBD公司产品。MTT购于Sigma公司。ATP荧光发光试剂盒为北京金紫晶生物医药技术有限公司产品。二甲基亚砜（DMSO）购于晶美公司。慢性粒细胞性白血病细胞株（K562细胞）购自上海细胞库。FITC标记的抗CD3 mAb和PE标记的抗CD56 mAb购自Pharmingen公司。 毕业论文 　　1.2; 方法 毕业论文 　　1.2.1; PF的制备; 按照刘月新等［1］ 报道的方法稍加改进制成。经紫外分光光度法检测, PF中蛋白质含量为1 g/L。 毕业论文 　　1.2.2; CIK细胞的制备; 抽取健康自愿者的静脉血20 mL, 用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞（PBMC）, 加RPMI1640培养液调整细胞的密度至1×109个/L, 于50 mL培养瓶中培养。于当天加入IFNγ（1×106 U/L）, 放置37℃、 50 mL/L CO2孵育箱中培养24 h。次日, 将悬浮的细胞转移到6孔板培养中, 分别加入终浓度为100 mg/L的PHA、 3×105 U/L; IL2、 133 μg/L抗CD3 mAb及1×105 U/L IL1α, 每3 d半量换液1次, 同时补加IL2至3×105 U/L。以此方法诱导培养7 d后, 收获细胞, 用FITC标记的抗CD3 mAb及PE标记的CD56 mAb, 采用流式细胞术鉴定具有CIK细胞表型特征的CD3+ CD56+细胞。 毕业论文 　　1.2.3; PF对CIK细胞增殖的影响; 将培养7 d的CIK细胞数调整至2×109个/L。于96孔板中每孔加入CIK细胞悬液和不同稀释度（1∶2~1∶32）的PF液各100 μL, 每组设3个平行对照孔, 置37℃、 50 mL/L CO2孵育箱中培养72 h, 用ATP荧光发光法测定淋巴细胞的增殖（ATP的荧光强度与活细胞的数量呈正比）。 毕业论文 　　1.2.4; CIK细胞杀伤活性的检测; 将培养7 d的CIK细胞分为A、 B两组, A组为只加CIK细胞悬液的对照组; B组又分为5个浓度组, 在CIK细胞悬液中加入终浓度分别为1∶4、 1∶8、 1∶16、 1∶32、 1∶64的PF。于37℃、 50 mL/L CO2孵育箱中培养72 h后, 分别收集A、 B组中的CIK细胞, 并调整细胞密度为2×109/L。另外, 将培养至对数生长期的K562细胞数用RPMI1640培养液调整至1×108个/L。将A、 B组中的CIK细胞分别与K562细胞混合后, 按20∶1的效靶细胞比加入至96孔板中, 每组均设5个平行孔, 置37℃、 50 mL/L CO2孵育