艾炷灸对D-半乳糖衰老小鼠大脑组织形态及超微结构影响.docVIP

艾炷灸对D-半乳糖衰老小鼠大脑组织形态及超微结构影响 　 作者：赵利华，韦良玉，王进声，姚平，陈煌 【摘要】 目的观察艾炷灸对脑组织形态和超微结构的影响。方法将健康3月龄昆明雄性小鼠按随机区组设计分为：造模组、生理组、艾灸1组、艾灸2组、电针组、尼莫地平组6组，每组各12只。另设自然衰老组（16月龄）昆明雄性小鼠12只。造模组、艾灸1，2组、电针组、尼莫地平组，连续42 d颈背部皮下注射D－半乳糖造成小鼠衰老模型；生理盐水组连续42 d颈背部皮下注射等量生理盐水，12 d后艾灸1，2组，分别选取小鼠“足三里、悬钟”，“关元、百会”行艾柱灸治疗，电针组取“足三里、悬钟”治疗，尼莫地平组给予尼莫地平灌胃，均为隔日1次，共15次。采用光镜观察脑组织形态学变化和神经元密度，电镜下观察脑组织超微结构。结果①生理组大脑皮层、海马CA3区细胞结构正常。模型组、自然衰老组可见皮层、海马CA3区变薄，大部分神经元变性，胞核与胞浆界限模糊，核固缩，核仁消失。艾灸1，2组、电针组和尼莫地平组仍有不同程度的神经细胞变性，但变性神经细胞数量显著减少。②各组小鼠脑皮质及海马CA3区神经元密度差异有显著性意义（Plt;0.01），模型组、自然衰老组与生理组、艾灸1，2组、电针组、尼莫地平组神经元密度比较差异有显著性意义（Plt;0.01），模型组、自然衰老组神经元细胞密度下降。③大脑皮质超微结构，生理组神经细胞结构清晰，胞浆较宽，细胞器丰富，核仁清楚。模型组和自衰组神经元细胞变性，凋亡细胞器减少。其他各治疗组超微结构损伤较模型组和自衰组减轻。结论艾炷灸“足三里、悬钟”，“关元、百会”可减轻D-半乳糖造成的氧化损伤，保护脑组织形态及其神经元细胞超微结构。 【关键词】 艾炷灸； D-半乳糖； 病理形态； 超微结构 随着年龄的增长，大脑神经细胞数量减少，突起萎缩，大脑为首的中枢神经系统会出现健忘、反应迟钝、动作不协调等脑萎缩症状，甚至丧失社会活动能力、生活不能自理的老年痴呆的证候。祖国医学称为“髓海不足”。《灵枢·海论》早有明确记载：“髓海有余，则轻劲多力，自过其度”,“髓海不足，则脑转耳鸣，胫酸眩冒，目无所见，懈怠安卧。”清代汪昂的《本草备要》亦述：“人之记性均在脑中，小儿善忘者，脑未满也，老年健忘者，脑渐空也。”历代医家都重视艾炷灸防治疾病，延年益寿，故有“保健灸”“长寿灸”之说。目前临床研究证实针灸对脑萎缩、老年性痴呆等有较好的疗效［1，2］。本文从大脑组织形态和超微结构的变化探讨艾炷灸延缓脑衰老的作用机制。 　　1 材料与仪器 　　1.1 动物健康3月龄昆明雄性小鼠。体质量（30±2）g，80只。另购置老年前期（16月龄）昆明雄性小鼠12只。均由广西医科大学动物中心SPF实验室提供（动物许可证号：SCXK桂2003-0003）。 　　1.2 艾灸用品精制艾绒为苏州东方艾绒厂提供。 　　1.3 仪器和试剂奥林巴斯生物显微摄影系统（BX60 PM20 型，日本）；全自动轮转式组织切片机（HM355S 型，MICROM德国）；Matic Images Advanced 3.2病理图文分析系统(Motic China Group Co.,Ltd.)；JEM100CX-II透射电镜。D-半乳糖为国药集团化学试剂有限公司提供；尼莫地平片为山西亚宝药业集团股份有限公司提供；0.9%生理盐水为广西中医学院一附院制剂室提供； 4%多聚甲醛、戊二醛（上海国药集团化学试剂有限公司）；1%锇酸、丙酮、环氧树脂812+815、醋酸铀、枸橼酸铅（北京大学医学部病理学系制备）。 　　2 方法 　　2.1 动物分组用Morris水迷宫筛选游泳距离不低于2 600 cm/2 min、体质量不低于28 g的72只健康雄性小鼠。按随机区组设计将72只小鼠分为：造模组、生理组、艾灸1，2组、电针组、尼莫地平组6组，每组各12只。16月龄昆明雄性小鼠12只为自然衰老组（简称自衰组）。 　　2.2 造模方法参照文献［3］用D-半乳糖颈背部皮下注射，建立亚急性衰老小鼠模型。将D-半乳糖试剂与生理盐水按1.2（g）：100（ml）混匀为（12 mg/ml），造模组、艾灸1，2组、电针组、尼莫地平组每天以D－半乳糖按120 mg/kg/d颈背部皮下注射（相当于每10 g体重注射0.1 ml浓度为1.2%的D－半乳糖溶液），连续42 d，同时对生理组颈背部皮下注射等量的生理盐水42 d。 　　2.3 治疗方法造模第13天开始治疗,艾灸1组选取小鼠“足三里、悬钟”，艾灸2组选用“百会、关元”进行艾柱灸治疗，时间选择上午9:00～11:30，选取小鼠双侧“足三里”（先灸）、“悬钟”（后灸），及“百会”（先灸）、“关元”（后灸），灸后用棉签轻轻按压穴位。每次3壮/穴。定位取穴按照《实验针灸学》［4］和《实验