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萘乙酸对K562细胞及正常人外周血淋巴细胞遗传物质损伤效应比较
萘乙酸对K562细胞及正常人外周血淋巴细胞遗传物质损伤效应比较
作者:倪磊,宋土生,廉姜芳,王爱英,刘丽英,黄辰 【摘要】 目的 比较萘乙酸(naphthalene acetic acid, NAA)对K562细胞和正常人外周血淋巴细胞染色体损伤效应的差异。方法 常规方法制备姐妹染色单体互换(SCE)和微核,检测NAA对K562细胞与正常人外周血淋巴细胞SCE、微核形成率以及细胞分裂指数的影响。结果 NAA可诱导K562细胞和人正常淋巴细胞微核形成和提高SCE频率,与对照组相比均存在显著性差异;NAA诱导K562细胞微核形成率和SCE频率绝对增长值高于正常淋巴细胞组。NAA显著抑制K562细胞和人正常淋巴细胞分裂指数,绝对抑制率也表现为K562细胞高于正常淋巴细胞。结论 NAA具有诱导细胞染色体损伤的作用。
【关键词】 萘乙酸;K562细胞;淋巴细胞;SCE;微核
萘乙酸(naphthalene acetic acid, NAA)作为植物生长激素,广泛应用于植物的组织培养以及无土栽培等植物种植业中。现已证明萘对人体具有明显的毒副作用,可以引起染色体畸变[1]。一些萘的衍生物,如萘胺,可引起职业性膀胱癌;而另一些萘的衍生物,可以用于临床治疗,如萘芬被用于治疗皮肤病[2]。本研究组证明萘乙酸可以抑制K562细胞的增殖[3],但是萘乙酸是否可以成为肿瘤治疗的药物,尚需要对其进行遗传毒理的分析。本文应用NAA处理正常人外周血淋巴细胞以及白血病K562细胞,研究其对遗传物质的作用。
1 材料与方法
1.1 材料 NAA(化学纯,97.0%),购自中国医药集团上海化学试剂公司,K562细胞购自上海细胞所,健康个体肝素抗凝外周血采自西安交通大学医学院。
1.2 方法
1.2.1 实验分组 K562细胞和健康个体外周血淋巴细胞均分为空白对照组、NAA 50μmol/L组和NAA 100μmol/L组。每组设3个平行实验组。K562细胞浓度为5×104/mL,在37℃、5% (体积分数)CO2下培养到实验时间。健康个体外周血作微量全血培养。
1.2.2 微核实验 在37℃、5%(体积分数)CO2下培养72h后,离心收获细胞,用低渗液处理细胞10min。离心后,用新鲜配制的甲醇/冰醋酸(3∶1)固定细胞,制片,Giemsa染色20min,镜检,以1000个细胞为一组计算微核的千分率。微核的识别:在完整的淋巴细胞浆内与主核分离,直径小于主核的1/3,结构和染色与主核相同[2]。
1.2.3 SCE实验 在37℃、5%(体积分数)CO2下培养48h,加入Brdu,使其终质量浓度为10mg/L,继续培养。在培养终止前4h加入秋水仙素,于72h收集细胞,制片,UV照射30min,水洗,Giemsa法染色,观察完整并明显分染的中期相细胞,以50个细胞为一组,求得每个细胞的互换率[3]。
1.2.4 分裂指数 统计1000个细胞中分裂细胞的数目。
1.3 统计学处理 各实验处理组与对照组测得的数据以±s表示,应用SPSS医学统计软件作t检验,以Plt;0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 NAA对K562细胞和健康个体淋巴细胞微核形成的影响 NAA可以诱导正常淋巴细胞微核形成,与对照组相比差异存在统计学意义(Plt;0.05)。但在50和100μmol/L NAA处理组间差异无统计学意义(Pgt;0.05)。NAA也可诱导K562细胞微核形成,但与对照相比无显著性差异,而绝对数值的增加高于正常淋巴细胞(表1)。
表1 NAA对人正常淋巴细胞和K562细胞微核形成率的影响(略)
Table 1 The effect of NAA on the frequency of micronucleus formation of k562 cell and normal lymphocytes
*Plt;0.05, **Plt;0.01 vs. control group
2.2 NAA对K562细胞和健康个体淋巴细胞姐妹染色单体互换(SCE)频率的影响 与对照相比,NAA可以提高人正常淋巴细胞和K562细胞SCE频率,差异存在显著性(Plt;0.01)。而在50和100μmol/L NAA处理组间差异均无显著性(Pgt;0.05)。NAA对K562细胞SCE作用的绝对数值高于相应的对照组(表2)。
表2 NAA对人正常淋巴细胞和K562细胞SCE频率的影响(略)
Table 2 The effect of NAA on the sister chromatid exchange frequency of k562 cells and normal lymphocytes
*Plt;
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