蒲薏颗粒药效学实验探究.docVIP

蒲薏颗粒药效学实验探究 　 作者：迟明艳 黄勇 王爱民 兰燕宇 王永林 【摘要】 目的对蒲薏颗粒进行药效学研究。方法观察蒲薏颗粒对荷瘤(H22)小鼠增效减毒作用，对艾氏腹水癌(EAC)小鼠生命延长率的影响，对体外培养人食管癌(ECA-109)细胞的影响，对荷瘤小鼠免疫功能的影响。结果蒲薏颗粒能增强化疗药物抑瘤作用、拮抗化疗药物对WBC及骨髓有核细胞的抑制;对艾氏腹水癌小鼠生存时间有明显的延长作用;并显著抑制ECA-109细胞增殖的细胞毒作用;同时该药具有提高小鼠细胞免疫功能的作用。结论蒲薏颗粒具有抗癌和增强免疫作用。 【关键词】 蒲薏颗粒; 抗肿瘤; 免疫增强 蒲薏颗粒由蒲公英、生薏苡仁等5味中药组成，具有清热解毒、活血化瘀、补益气血的功效，临床用于肿瘤放、化疗所致的气血两虚有很好的疗效，我们根据其功能主治进行了有关的主要药效学实验。 　　1 材料 　　1.1 动物 KM小鼠，雄性，体重18～22 g;SD大鼠，雄性，体重180～210 g，均由贵阳医学院实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK(黔)2002-0001。BALB/C小鼠(SPF级)，雄性，体重16～20 g，简阳市简城比尔动物养殖场提供，动物合格证号：0011159。 　　1.2 瘤株 小鼠肝癌H22：由华西医科大学肿瘤研究所提供;艾氏腹水癌(EAC)细胞，由重庆医科大学生物工程系超声研究所提供。人食管癌细胞(ECA-109)：由中科院生命科学研究所提供。 　　1.3 药物 蒲薏颗粒(PY)由贵州渝生制药有限公司提供，每克颗粒含4g生药，批号环磷酰胺(CTX)，上海华联制药有限公司生产，批号：031001;5-氟尿嘧啶(5-Fu)，上海旭东海普药业有限公司生产，批号：030405;噻唑蓝(MTT)：Sigma公司出品，批号：206-069-5。 2 方法与结果 　　2.1 蒲薏颗粒对小鼠肝癌H22化疗的增效减毒作用[1～3]在无菌条件下于小鼠右腋皮下接种2×107/ml的H22细胞悬液，0.2 ml/只，24 h后按体重随机分为模型对照组，5-Fu组，PY高、低剂量组，5-Fu加PY高剂量组，5-Fu加PY低剂量组。各组小鼠按表1的剂量灌胃(ig)给药，1次/d，连续10 d，模型对照组给予等量生理盐水(NS)。停药次日称重后，摘眼球取血作外周血象检查，脱颈椎处死动物，剖取并称重瘤块，计算抑瘤率。剥离小鼠右股骨，用1640培养液通过针头反复冲洗骨髓并测定洗液中骨髓有核细胞数。见表1。 　　肿瘤抑制率(%)=(1-实验组平均瘤重对照组平均瘤重)×100% 　　由表1结果可见，蒲薏颗粒与5-Fu合用，可使5-Fu的肿瘤抑制率明显提高;白细胞、骨髓有核细胞计数也有显著性差异(Plt;0.05或Plt;0.01);提示蒲薏颗粒具有增效减毒的作用。表1 对小鼠肝癌H22化疗的增效减毒作用与模型对照组比较，*Plt;0.05，**Plt;0.01;与5-Fu组比较，#Plt;0.05，##Plt;0.01;n=10 　　2.2 蒲薏颗粒对艾氏腹水癌(EAC)小鼠生命延长率的影响 [4～5]于无菌条件下小鼠腹腔常规接种艾氏腹水癌小鼠(1×108/ml)的细胞悬液，瘤液0.2 ml/只，接种后24 h，按体重随机分为5组：模型对照组，CTX组(20 mg/kg)，PY高、中、低剂量组，各组小鼠按表2的剂量ig给药，1次/d，连续10 d，模型对照组给予等量NS。记录存活天数，计算生命延长率，比较各组间差异。结果见表2。 　　生命延长率(%)=给药组平均生存时间-对照组平均生存时间对照组平均生存时间×100%表2 蒲薏颗粒对艾氏腹水癌(EAC)小鼠生命延长率的影响由表2结果可见，蒲薏颗粒高、中、低剂量组EAC荷瘤小鼠生存时间与模型对照组比较均有显著差异,生命延长率最高达50%以上,表明该药对艾氏腹水癌小鼠生存时间有明显的延长作用。 　　2.3 对体外培养人食管癌(ECA-109)细胞的影响[1]取大鼠30只，随机分为对照组(NS 10 ml/kg)、环磷酰胺组 (20 mg/kg)、蒲薏颗粒组(12 g/kg)。各组动物分别ig给药，1次/d，连续7 d。末次ig后2 h乙醚麻醉，无菌条件下股动脉取血，4℃ 2 500 r/min离心25 min，吸取血清，同组血清混匀，以0.22 μm微孔滤膜正压过滤除菌，各组保留部分全血清，其余血清用1 640分别配成含鼠血清60%，30%，15%的培养基，-40℃保存备用。 　　　取在对数生长期的人食管癌细胞标准株(ECA-109)，用胰酶消化后，稀释成 1×105个/ml，台盼蓝染色，检测活细胞达95%以上。分别将肿瘤细胞接种于96孔板，每孔100 μl，培养24 h后，观察细胞贴壁后，分别换成含不同浓度大鼠血清