通过联合的随机和定点饱和突变改善Thermobifida+fusca海藻糖合成酶的特性.pdfVIP

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2017-09-11 发布于安徽
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通过联合的随机和定点饱和突变改善Thermobifida+fusca海藻糖合成酶的特性.pdf

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海藻糖合成酶的特性摘要具有较高酶活性和热稳定性的海藻糖合成酶在酶法生产海藻糖中很重要。我们用实验室进化方法获得了酶活力和热稳定性有所提高的突变酶。运用随机突变和定点饱和突变相联合的策略来产生突变库。经过一轮的随 325位发生了氨基酸替换，为D266G／Q325R。为了获得更好的优化酶，我采用了半理性设计。以寡基1，6-葡萄糖海藻糖合成酶的三维结构。结合分析TreS-fu与四种来自不同微生物的功能 PCR介导定点突变的方法，将这5个位点的氨基酸分别进行定点饱和突变，获得了A74(F227C／D266G／Q325R)、野生型酶有不同程度的提高。被三个氨基酸取代的突变体A74的比活力是野生型酶的2．6倍，对其动力学分析表明，突变子A74的酶活力最适温度结果表明这些的突变效应呈现出多样性。研究结果表明，该半理性设计不仅可提高酶的活力和热稳定性，而且为揭示TreS结构和功能的关系提供了一个新的研究模型。 THECHARACTERISTICSoF IMPROVING A SYNTHASEFRoM刀珊^幻8，脚4F￡毽C么BY oFRANDoMAND CoMBINATION MUTAGENESIS ABSTRACT Trehalosewith and isanattractive activitythermostability synthasehigher candidatein oftrehalose．Wehaveused enzymaticproduction laboratory evolutionmethodstoobtainmumntSwiththe ofenhanced goal of combined ofrandom and and TreS．A strategy mutagenesis activity was to mutantlibraries．Aftera site—saturation used single mutagenesis generate roundofrandom wasisolmedwhichexhibited80％ mutagenesis，mutant increased with selected enzyme．The activitycomparedwild-type been andkinetic thatit has characterirized bysequencing Gln325whichWassubstituted carriedtwomutationsat and