微生物全细胞转化法制备（R）-扁桃酸的的分析研究.pdfVIP

中文摘要 摘要 光学纯扁桃酸是一种重要的手性药物中间体，被广泛应用于多种手性药物的合成，国际 市场需求呈现较快增长之势。开展生物催化法制备光学纯扁桃酸的研究，筛选出用于制各光 学纯扁桃酸的菌株，开发出新的生产制备途径，对于手性生物催化具有重要的现实意义和理 论价值。 本文研究了利用微生物全细胞转化法，分别以外消旋扁桃酸和苯甲酰甲酸为底物，通过 不同的途径来制备僻)．扁桃酸。 对实验室保藏的包括细菌、酵母和霉菌在内的大量菌株进行筛选，得到能有效转化外消 46．3％；并筛选得到能高效催化苯甲酰甲酸不对称还原为僻)一扁桃酸的菌株葡萄酒酵母 ∞c幽田D叼∞酣8f；f{碓oi出螂)，产物光学纯度可达99．3％，摩尔收率74．2％。 对胁wf6a“e，f堋sp．转化消旋体扁桃酸的过程进行了研究，初步确定其转化是动力学选 择性降解过程，即优先降解了消旋体底物中的(跏扁桃酸，从而获得了僻)．扁桃酸。 对B陀vi施c据rj姗sp．催化选择性降解反应的环境因素进行考察，确定了最优反应条件为： 底物浓度30 mmo帆，pH7~8，温度35℃，细胞／底物量相对比1．1咖ol，转化时间36h，产 物俾)一扁桃酸光学纯度99％e．e，收率48．7％。通过在肌v西dc耙rfMsp．培养基中添加部分羟 基酸及扁桃酸代谢中间体作为诱导物，可以提高细胞转化活力，并能促进菌体生长，提高最 终转化效果。 研究了丑m，曲Dc旭rfⅢSp．以不同方式催化转化的效果，通过以O．5％或1％扁桃酸作为唯 一碳源培养菌体可直接拆分获得僻)一扁桃酸；而在菌体培养24h后的发酵液中直接添加消旋 体底物进行转化，也能得到(R)．扁桃酸，这两种方式转化产物的光学纯度均可达到99％e．e。 研究了在B旭v西口cfP，f姗2Sp．转化体系中添加营养物对转化的影响，发现添加碳源、氮源 和金属离子等营养因子对菌体细胞转化没有明显促进作用。为提高肌v西dc胞rf“m sD．菌体的 利用率，进行了菌体多批次反应和流加底物试验，菌体转化3批次、连续流加3次，均能表 现出较好的重复性，最终可获得较高光学纯度的产物。 7．O，培养温度30℃， 对＆e啦筘Df出淞茵体培养条件进行考察，确定了初始培养条件为：pH 培养时间24 应条件进行了优化，确定了最优反应条件为：35℃，pH7．5，细胞，底物相对量为1咖ol，底 物浓度30mmol／L，以1％的葡萄糖作为辅助底物，反应48h。在优化条件下，产物转化率从 74．2％提高到95％，光学纯度大于99％e．ef。 研究了＆gz，枷Dfc如淞细胞催化反应的稳定性，菌体细胞经20批次，960h的连续反应， 转化收率仍保持在80％左右。考察了在量P肼阳D耐gw转化液中，金属离子对转化的影响，发 现z督+、c0+、H，等离子对转化有较强的抑制作用，丽c02一浓度在o-smmol几时能显著提 高转化率。通过比较发现新鲜湿菌体较干燥后的茵体转化效率更高。 通过在S．g，，枷D娩w培养基中添加酮类诱导物发现，该类诱导物的添加不能明显提高转 垩塑盔兰堡主兰垡笙苎 发现Hg”离子的加入，产物转化率有了～定提高，但菌体细胞催化还原反应时却丧失了立体 选择性，产物几乎为消旋体。 考察了爱e碱舻D沈撕对不同底物催化还原反应的特异性，该菌催化还原苯乙酮时产物为 僻型，而催化还原旺一羟基苯乙酮的产物却是僻)一型。 对自制e碱芦D浊船还原获得的∞)．扁桃酸粗产品进行了鉴定和纯度检测，所得粗产物 化学纯度98％，光学纯度99‰A。 关键词：僻)_扁桃酸，全细脆生物转化，短杆音，选择性降解，葡萄酒酵母，不对标还原 II Abs廿act Abstract mandelic Optical acidisaversatilechir