锈凹螺褐藻胶裂解酶的酶学特性及褐藻胶寡糖的活性的分析研究.pdfVIP

锈㈣螺褐藻胶裂解酶的酶学特悻发褐藻胶寡糖的活性研究 锈凹螺褐藻胶裂解酶的酶学特性 及褐藻胶寡糖的活性研究 摘要 本文对褐藻胶裂解酶在国内外的研究与进展和褐藻胶寡糖的的活 性进行了综述，阐明了褐藻胶裂解酶和褐藻胶寡糖的研究对国民经济的 发展所起的重大作用。实验从来源于海洋的食藻性锈凹螺(Chlorostoma rustica)的消化腺中分离纯化出～种褐藻胶裂解酶(AIginateLyase)， 通过对其分离纯化与制备工艺的探讨，理化性质和催化动力学的研究， 获得了该褐藻胶裂解酶的各项性能参数等有价值的信息，为今后进一步 丌展该酶的研究与改造、生产与应用奠定理论基础。在此基础上利用此 酶裂解褐藻胶得到褐藻胶寡糖，并对褐藻胶寡糖的活性进行了研究。 本文采用硫酸铵沉淀、离心超滤、DEAE—SephadexA25、Sephadex S-300 G．100和Sephacryl rustica)消化腺中分离纯化出褐藻胶裂解酶(AlginateLyase)，得到电 泳纯酶制品，此褐藻胶裂解酶的分子量为28KD，反应的最适温度为40 裂解酶活性具有明显的抑制作用，而M92+，Zn”，Na+和K+则具有促进 作用；采用透明圈法和底物法验证了此裂解酶对聚甘露糖醛酸和聚古洛 性。利用膜分离技术对酶解产物进行分离得到了分子量不同的3中寡糖 I(MW1 用P6对褐藻胶寡糖III进行进一步的纯化，并利用TLC和HPLC对酶解工 艺和分离纯化进行快速的检测。采用化学发光法和大肠杆菌法研究了它 们对02’、OH和次氯酸三种自由基的清除作用，采用Fe”诱发卵黄 蛋白PUFA过氧化体系研究了寡糖对抗脂质过氧化的效果。褐藻胶寡糖 I，II和III对3种自由基均有较好的清除作用，而且清除活性随糖浓度 so 的增加而加强。在02’一体系中，褐藻胶寡糖I清除效果要好于Vc，IC 锈㈣糍褐垛胶裂解酶的酶学特性技褐藻投寡糖的活性研究 为8l_tg／mL。在OH和清除次氯酸自由基体系中，寡糖I和II对OH的 清除效果比寡糖III显著的多。在抗脂质氧化体系中，三种不同分子量的 褐藻胶寡糖1、II和III的ICso值分别为0 1lmg／mL和 14mg／mL、0 009mg／mL。脂质过氧化物的抑制效果和对上述三种自由基的抑制效果 相反。实验表明褐藻胶寡糖在四种体系中均有很好的清除作用，分子量 大小对褐藻胶清除自由基的活性有显著影响。 关键词：褐藻胶裂解酶；褐藻胶寡糖：自由基清除；抗氧化 锈㈣螺褐藻胶裂解酶的酶学特性及褐凝胶寡糖的活性研究 of Charaterization from LyaseChlorostomarustica Alginate andthe ofBio-chemicalof Study ActivityAlginate oligosaccharides Abstract of and on andthebiochemical advances The alginate activity prospects lyase werereviewedinthis the ofthe