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谷氨酸对大鼠纹状体神经元活动影响 　 作者：李伟红 庄晓燕 高素华 张红焦 金菊 常志杰 【摘要】 目的:研究谷氨酸（L-glutamic acid，GLU）及受体阻断剂MK-801对雄性大鼠纹状体（striatum ，STR）神经元自发放电活动的影响。方法: 应用微电泳方法记录纹状体神经元自发放电活动。结果: 微电泳GLU使84.13%STR神经元自发放电频率加快。在43个STR神经元中直接微电泳MK-801可使62.79%STR神经元自发放电频率降低。在微电泳GLU产生兴奋效应的33个STR神经元中，微电泳GLU期间给予MK-801拮抗GLU的兴奋效应，可使 90.91%已对GLU产生兴奋效应的STR神经元放电频率减慢。结论: GLU对STR神经元起兴奋作用， 但其兴奋作用可被MK-801所拮抗，当直接微电泳MK-801时，可使STR神经元产生抑制效应。 研究提示抗谷氨酸作用的药物有抗帕金森病（Parkinson disease，PD）的作用。 【关键词】 微电泳; 纹状体; 谷氨酸; MK-801 　　纹状体（STR）是基底神经节中的一个重要核团，由尾核、壳核和苍白球组成。尾核和壳核称为新纹状体;苍白球称为旧纹状体。本研究指的是新纹状体。它主要接受大脑皮层和皮层下的传入纤维，再发出轴突投射到苍白球和黑质［1］。这些核团间存在着复杂的纤维联系，共同参与躯体运动的调节。因此本实验采用微电泳及细胞外记录方法观察GLU和阻断剂MK-801对STR神经元自发放电活动的影响，以探讨GLU在躯体运动中的调节作用。 　　1材料和方法 　　1.1材料 　　1.1.1实验动物 采用Sprague-Dawley雄性大鼠40只，体重250g±30g，由辽宁医学院实验动物中心提供。 　　1.1.2实验试剂 GLU、MK-801、焦油紫均由美国Sigma公司提供，乌拉坦、多聚甲醛由沈阳化工试剂厂提供。 其它均为国产分析纯试剂。 　　1.1.3实验仪器 脑立体定位仪（西北光学仪器厂）;51217型微管拉制仪（美国STOELTING公司）;微电泳仪（中科院上海生理研究所）;SMUP生物信号处理系统（上海第一医科大学）;CM800冰冻切片机（日本Leica公司）;OLYMPUS 光学显微镜（日本产）。 　　1.2实验方法 　　1.2.1手术 以20%乌拉坦（1ml/100g）腹腔麻醉后，将大鼠置于脑立体定位仪上行常规开颅术。 　　1.2.2微电泳及细胞外记录 根据Paxionsamp;Watson的大鼠脑图谱［2］，对纹状体（STR）定位（高度从脑表计）。坐标为前囟后-0.8～1.2mm，中线旁开2.5～3.5mm，脑表下5.0～ 6.0mm。 采用51217型微管拉制仪所拉制的3管玻璃微电极，尖端直径4～8μm，中心管（5～12MΩ）管内灌注含1%滂胺天蓝的3.0M NaCl溶液作为神经元放电活动的引导电极，外周管电阻为20～100MΩ，按需要分别灌注以下药物:GLU（1.0 mol/l，pH 8.0）、MK-801 （0.01mol/l，pH4.0）、NaCl（3 mol/l，pH7.0，对照）。借助微电极推进器将微电极缓慢插入纹状体，记录STR神经元自发放电情况。使用微电泳仪进行微电泳，电泳电流为10～150nA，电泳时间为20s，滞流电流为5～10nA，可根据实验需要及神经元情况进行适当调节。除GLU外，其余皆用正电流泳入。分别观察GLU及MK-801对STR神经元放电活动的影响。再在微电泳GLU期间，给予MK-801，观察对STR神经元放电的影响。为了排除可能发生的电流作用，只要注入NaCl引起任何放电变化，该资料则不列入统计。神经元放电活动由微电极引导信号，经放大器放大、滤波、显示于示波器上，并输入SMUP生物信号处理系统，计数神经元放电情况，结果自动制成序列密度直方图。 　　1.2.3组织学定位 实验结束后，经中心管给予20μA阴极直流电，经微电极电泳滂胺天蓝到记录部位，通电10～15min。对麻醉后实验动物开胸，经升主动脉首先用100ml生理盐水（37°C）快速冲洗血管后，继而用含4%多聚甲醛的0.1M磷酸缓冲液500ml灌流固定。开颅取出完整脑组织，做成长度为 1.5cm 的组织块，放入含4%多聚甲醛的磷酸固定液中固定（4° C，3h）;再将组织块移入含20%～30%蔗糖磷酸缓冲液中（pH=7.4，4°C），浸至其沉底。24h后，置于0.1M磷酸缓冲液中脱糖（3次，每次10min），后置于连续冰冻切片机内，-20°C， 做连续冠状切片，切片厚30μm。焦油紫染色，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。光镜下进行组织学鉴定并拍照。 　　1.2.4数据处理 分别记录微电泳前后神经元放电频率，同时还记录微电泳后神经元兴奋或抑制的持续时间。