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软骨组织工程种子细胞源探究进展 　 作者：王翠芳，冯万文，武天佑 ，孙正义 【关键词】 软骨组织工程种子细胞源 　　多种原因造成的关节软骨病变比较常见，软骨损伤后缺乏自愈能力，软骨缺损的修复一直是临床的难题。随着细胞生物学和材料科学的迅速发展，应用组织工程学技术修复软骨病损已成为可能，而优化种子细胞源是应用这一技术的前提和关键［1］。本文就有关软骨组织工程种子细胞源的优化获取、存在的问题及其解决等研究进展作一综述。 　　1 软骨组织工程对种子细胞源的要求 　　组织工程软骨的种子细胞应符合下列要求：来源丰富，取材方便；有较强的增殖传代能力；与载体材料接种后能保持增殖能力和较高的黏附率，植入受区后能保持修复组织的表型；对机体或供区损伤小，临床应用的生物安全性和无明显的免疫排斥和其他潜在危险［2］。 　　2 软骨组织工程的种子细胞源 　　2.1 自体软骨细胞 　　理论上讲自体软骨细胞是软骨组织工程最理想的种子细胞源，不仅功能相同，不存在免疫排斥反应，而且不需要诱导分化培养。但研究表明种子细胞浓度为(5～6)×107/ml时，形成的新生软骨形态最佳，但是自体软骨组织取材受限，软骨细胞增殖能力低，难以达到应有的细胞数量，体外培养扩增容易发生去分化而失去原有的表型［3］，因此直接源于自体软骨组织的种子细胞，体外单层培养难以获取大量的细胞以满足组织工程对种子细胞的需求。 　　为解决上述难题，使用生物反应器三维培养可使软骨细胞快速扩增，建立能够长期培养、表型稳定的永生化软骨细胞。生物反应器能控制pH、机械能力、营养供给条件等，为细胞的生长、分化提供最适宜的环境。根据自体软骨细胞培养所需的条件，仿生性地设计接近体内环境的软骨生物反应器，模拟了体内的细胞外基质微环境。相同容积的生物反应器比普通培养方式，多出数10倍甚至上100倍的细胞。可减少细胞去分化现象，有利于细胞表型的维持，提高种子细胞的质量。有利于软骨细胞的培养、扩增及表型维持。 　　2.2 同种异体软骨细胞 　　与体内其他组织相比，软骨有其独特的结构和免疫学特点。软骨无血管、淋巴管和神经，细胞包埋在由软骨基质形成的软骨囊内，可阻挡免疫细胞直接与其接触，不易被机体免疫系统攻击，软骨基质抗原性低，一般不引起或仅有轻微的免疫反应，获取种子细胞时要经过消化分离和体外培养等一系列处理，软骨细胞表面抗原可被进一步消弱。同种异体软骨来源广，易获取，一次可获取大量软骨细胞，所以同种异体软骨是值得研究的种子细胞来源［５］。应用同种异体软骨细胞作种子细胞，在具有免疫力动物体内形成同种异体工程化软骨，并用于软骨缺损修复的实验报道，未发现明显的免疫排斥反应［6］。研究表明胚胎来源的软骨细胞较成体软骨细胞引起的异体排斥反应微弱，提示在同种异体软骨组织工程中，胚胎来源的软骨细胞作为种子细胞是最佳选择［７］。对同种异体软骨细胞生物学特性和相关免疫反应问题的进一步研究，将为建立软骨组织工程种子细胞库奠定基础。 　　2.3 骨髓间充质干细胞(bone marrowderived mesenchymal stem cells，BMSCs) 　　骨髓中存在具有向多种细胞系分化潜能的BMSCs。Friedenstein发现骨髓中存在少量可以贴壁繁殖的BMSCs，条件培养液诱导可分化成为软骨细胞。Cancedda等［8］对BMSCs和骨膜细胞修复兔股骨髁软骨全层缺损进行了比较，发现两者均能形成软骨和软骨下骨。 　　ButnariuEphrat等［9］用BMSCs复合聚合物支架，自体和异体移植修复股骨负重区软骨缺损，结果自体BMSCs早期形成类透明软骨，异体BMSCs的免疫反应导致后期纤维化和骨关节炎改变。Gao等［10］分别用成骨和成软骨条件培养液诱导培养大鼠BMSCs，复合不同材料的双层支架植入裸鼠背部皮下，术后1周检测新生组织中含有Ⅰ、Ⅱ型胶原，认为BMSCs在不同生物活性因子的作用下，结合相应的生物材料可以构建出工程化的骨软骨复合体，因此，目前认为BMSCs是一种比较理想的种子细胞源。尽管BMSCs只有较强的增殖能力和多向分化潜能性，但其数量在全骨髓中仅占1／10５～1/10４，并且随传代次数的增加，其软骨分化潜能逐渐降低，必须通过适当的控制条件和诱导因素，使BMSCs保持增殖并分化为软骨细胞，也有研究表明重症骨关节炎病人BMSCs的成软骨能力明显降低［11］，并且最近研究证实当BMSCs培养传代90次后细胞发生癌变，声称这符合肿瘤细胞源于干细胞的假说，因此对BMSCs应用的生物安全性必须引起高度重视和深入研究［12］。 　　2.4 BMSCs与软骨细胞共培养 　　基于BMSCs和软骨细胞均不能完全满足组织工程对种子细胞的要求，那么将2种细胞优势互补，进行共培养来优化和扩大软骨组织工