迷迭香酸对慢性肾功能不全大鼠系膜基质及TGFβ1影响.docVIP

迷迭香酸对慢性肾功能不全大鼠系膜基质及TGFβ1影响 　中国论文联盟编辑。 作者：林威远, 黄荣桂, 郑兴中 论文代写 【摘要】 目的 观察迷迭香酸对慢性肾功能不全模型大鼠系膜基质及转化生长因子β1(TGFβ1)的 影响 。 方法 制作大鼠慢性肾功能不全模型(5/6肾切除),以迷迭香酸作为干预因素, 应用 免疫组织化学半定量法测定迷迭香酸对大鼠系膜基质成分纤维连接蛋白(Fn)、胶原Ⅳ(ColⅣ)及TGFβ1的影响,电镜观察肾小球病 理学 变化,测定血、尿肌酐值。 结果 (1)与对照组比较,迷迭香酸组肌酐清除率(Ccr)水平升高(Plt;0.05);(2)Fn、ColⅣ在肾脏细胞外基质的沉积减少(Plt;0.05);(3) TGFβ1表达减少(Plt;0.05)。 结论 迷迭香酸可以抑制TGFβ1的表达,减少Fn及ColⅣ在肾小球细胞外基质的沉积,延缓肾小球硬化,对慢性肾功能不全疾病可能具有 治疗 价值。 【关键词】 迷迭香酸; 肾小球; 细胞外基质; 肾切除术; 转化生长因子β; 疾病模型,动物 论文代写 　　细胞外基质(ECM)的增加是慢性进行性肾小球病变的特征,肾小球ECM积聚是肾小球疾病 发展 至肾小球硬化的主要病理改变基础。多种细胞因子通过对系膜细胞的作用参与调节肾小球ECM的分泌,导致肾小球结构和功能的异常,促进肾小球硬化。迷迭香酸(rosmarinic acid)为水溶性的多酚类化合物。1958年由Ellis首次从唇形科植物迷迭香(Rosmarinus offinalis L.)中分离得到，在植物中分布较为广泛,主要存在于唇形科、紫草科、葫芦科、椴树科、伞形科的多种植物中。由于迷迭香酸为天然抗氧化剂,有抗炎、免疫抑制等多种活性,对其进行 研究 开发具有一定的意义。笔者观察迷迭香酸对慢性肾功能不全模型大鼠系膜基质及转化生长因子β1(TGFβ1)的影响。 毕业论文 　　1 材料与方法 毕业论文 　　1.1 材料 成年雄性SD大鼠20只,6～8周龄,体质量(175±15)g[上海西普尔必凯实验动物有限公司,许可证号:SCCKCC(沪)20030002]。纤维连接蛋白(Fn)、胶原Ⅳ(ColⅣ)、TGFβ1免疫组织化学(SABC法)试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)。迷迭香酸(含量97%,美国Aldrich公司)。 　　1.2 方法 　　1.2.1 模型制备 大鼠分笼饲养于室温、日光照12 h、45%湿度的环境中,自由饮水,进食标准普通饲料。1周后采用Platt法切除5/6肾制作慢性肾功能不全模型[1],分2期完成:先背部切口切除左肾2/3,1周后切除完整右肾。术后2周静脉采血0.5 mL,查肌酐值,明显高于正常值(35～53 μmol/L)者符合入选标准。 　　1.2.2 分组 模型大鼠分为模型组和迷迭香酸组,未手术大鼠为对照组,每组6只。迷迭香酸组给予迷迭香酸100 mg·kg-1·d-1灌胃,另2组给予等容积蒸馏水灌胃。8周后,留24 h尿及心脏取血备查;切开腹腔,取出肾脏,4%甲醛缓冲液固定,石蜡包埋。另取部分肾组织，送电镜室检查。 　　1.2.3 免疫组织化学观察 采用SABC法,按试剂盒说明书操作。高倍镜(×200)下随机选择20个肾小球和20个肾小管间质,根据染色面积和强度进行半定量评分:无染色或微弱染色为0，染色面积lt;25%为1，25%～50%为2，50%～75%为3，gt;75%为4;基本不着色为0,着色淡者(淡黄)为1,适中者(棕黄)为2,深者(棕褐)为3。两者得分相加为最终值。 　　1.2.4 尿肌酐和血肌酐测定 采用全自动生化 分析 仪(德国Becman公司)检测尿肌酐和血肌酐值,按公式换算成肌酐清除率: 　　肌酐清除率=[尿肌酐浓度(mg/mL)×1 min尿量(mL)]/血肌酐浓度(mg/mL) 　　1.3 统计学处理 数据用x±s表示,采用SPSS 11.0处理方差检验组间差异。组间两两比较采用LSD检验。 　　2 结果 　　2.1 免疫组织化学观测评分 迷迭香酸可以抑制TGFβ1表达,减少Fn及ColⅣ在肾ECM沉积(表1)。 　　2.2 免疫组织化学改变 与对照组比较,模型组Fn及ColⅣ表达明显增多,肾小球黄色及棕黄色、棕褐色面积大,着色深;迷迭香酸组Fn及ColⅣ表达较对照组减少,黄色及棕黄色面积小,着色较浅。模型组TGFβ1表达较对照组明显增多,肾小管及间质黄色及棕黄色面积大,着色深;迷迭香酸组TGFβ1表达较对照组减少,黄色及棕黄色面积小,着色较浅(图1)。 　　表1 肾小球系膜细胞外基质及TGFβ1评分（略） 　　Tab 1