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超声提取夏枯草中总三萜类成分探究 　 作者：吕杏放 朱文斌 杨倬荣 周杨 黄春瑜 彭新生 【摘要】 　　目的：探讨夏枯草中总三萜类成分的提取工艺。 方法：采用正交试验设计方案优化夏枯草中总三萜类成分的超声提取工艺。结果：最佳提取工艺为提取温度65℃，85％乙醇，超声30min，10倍溶剂用量，超声提取3次。结论：超声提取既简便又高产，节能且环保。 【关键词】 超声提取 总三萜类 夏枯草 熊果酸 　　夏枯草是唇形科植物夏枯草Prunella vulgaris Linn．的干燥果穗或全草，别名夏至草、夏枯头。在我国主产于江苏、浙江、安徽和济南等地，主要化学成分为三萜类、甾体类、黄酮类、香豆素类、糖类和挥发油类等［1］，具有清肝、明目、散结、消肿、止痛之功效，临床用于治疗甲状腺肿大、淋巴结核、乳腺增生、高血压、肺结核、急性黄疸型传染性肝炎等疾病［2］。夏枯草属植物中含有多种三萜类成分, 主要为齐墩果烷型、乌苏烷型和羽扇豆烷型三萜。其药理活性成分熊果酸（UA）、齐墩果酸（OA）等三萜类化合物具有镇静、抗炎、抗菌、抗高血压、抗糖尿病、抗溃疡、降低血糖等多种生物学效应［3］。近年来研究发现，三萜类中的熊果酸（UA）具有抗致癌、抗促癌、诱导F9畸胎瘤细胞分化和抗血管生成作用，极有可能成为低毒高效的新型抗癌药物［4］；齐墩果酸（OA）具有保肝、免疫作用［5］。本实验采用正交试验设计，以夏枯草中总三萜类成分的含量为评价指标，考察乙醇为溶剂用超声提取的最佳工艺条件。 　　1 仪器与试药 　　KQ 5200 DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；UV-1800紫外-可见分光光度仪（上海美谱达仪器厂）；TGL-18G高速台式离心机（湖南星科科学仪器公司）；WK-1000A高速药物粉碎机（山东青州市精诚机械有限公司）。 　　夏枯草（干燥花序、果穗）购于广东东莞国药集团有限公司，经苟占平副教授鉴定为夏枯草属植物夏枯草(Prunella vulgaris Linn)。 　　熊果酸标准品购于中国药品生物制品检定所。活性炭（C.P），其余试剂均为A.R。 　　2 实验方法 　　2.1 夏枯草超声提取正交试验设计方案 　　2.1.1 因素水平 试验选择以下4个因素：乙醇浓度（A）、超声温度（B）、提取时间（C）、溶剂用量（D）作为考察对象，每个因素取3个水平（表1），以提取物中总三萜类成分含量为评价指标，采用L9（34）正交表进行正交试验设计。 　　表1 因素水平表（略） 　　2.1.2 夏枯草预处理 取干燥的夏枯草（花序﹑果穗）若干，粉碎成粗粉，干燥。 　　2.1.3 供试品溶液制备 准确称取9份夏枯草粉末，每份2.00g，分别置圆底烧瓶中，加入相应浓度和体积的乙醇，置超声器中提取，趁热抽滤；滤渣再次加入相应浓度和体积的乙醇，置超声器中提取；共超声提取3次，每次操作的条件和步骤一致，合并3次滤液，置于旋转回流蒸发仪中，60℃水浴浓缩蒸干所有溶剂。样品浓缩后，加无水乙醇（约15ml）超声溶解，过滤，加活性炭脱色并于70℃水浴15min，趁热过滤，加无水乙醇定容至25ml,取10ml样品溶液离心（4000r/min,20min）。离心后取上层澄清液5ml于25ml容量瓶，加无水乙醇定容至刻度，作为供试液备用。 　　2.2 测量方法的研究 　　2.2.1 对照品溶液的制备 准确称取熊果酸标准品20.00mg至容量瓶中，用无水乙醇配成浓度为80.00 g／ml的对照品溶液。 　　2.2.2 选择显色条件 采用L9（34）正交表设计正交试验：0.30 ml、0.40 ml、0.50 ml的5％香草醛-冰醋酸（A）；0.80 ml、1.00 ml、1.20 ml的高氯酸（B）；50.0 ℃、60.0℃、70.0 ℃的水浴温度（C）；10.0 min、15.0 min、20.0 min水浴时间（D）。用对照品溶液显色，以吸收度数值为检测指标，得出最佳显色条件为：5.0％香草醛-冰醋酸溶液0.30ml，高氯酸1.00ml，60℃水浴10min。 　　2.2.3 最大吸收波长的选择 精密吸取1.00ml熊果酸对照品溶液，用最佳显色条件显色。对显色体系在500nm～600nm波长范围内扫描，结果表明：在546nm处显示最大吸收，且空白无干扰，故选546nm为测定波长。 　　2.3 方法学考察［6，7］及含量测定 　　2.3.1 线性关系考察 精密吸取熊果酸对照品溶液（80.00 g／ml）0.50、0.60、0.70、0.80、0.90、1.00、1.10ml置带塞刻度试管中，100℃水浴挥干溶剂，加5.0％香草醛-冰醋酸溶液0.30ml，高氯酸1.00ml，60℃水浴10min，冰浴冷却，加冰醋酸5.00ml，摇匀，在546nm处测定吸收值，以熊果酸的