造血细胞生长因子在脐血体外扩增中作用探究进展.docVIP

造血细胞生长因子在脐血体外扩增中作用探究进展 　【关键词】 造血 　　摘 要：人脐血中造血干/祖细胞增殖能力强，但单份脐血数量有限，因此目前脐血移植多用于低体重儿童。造血细胞生长因子具有促进脐血扩增的作用，在不同的造血细胞生长因子联合作用下，可以有目的地进行体外扩增，从而使单份脐血有望解决高体重儿童及成人脐血移植存在的造血干/祖细胞数量不足的问题，为脐血广泛应用于临床移植作出贡献。 　　关键词： 造血细胞生长因子； 脐血； 造血干/祖细胞； 体外扩增 脐血干细胞移植的生物学基础研究和临床移植治疗近年来取得很大进展。自从1988年法国的Gluckman等首先成功移植治疗Fanconi贫血后，世界各地相继开展这方面工作，目前已成功用于治疗血液系统恶性疾病、恶性实体瘤、遗传性疾病等多种疾病，但因单份脐血可采量有限。Regidor［1］等报道单份脐血含有核细胞（nucleated cells, NC）和CD34+细胞分别为1.2×109和3.1×106。Gluckman［2］等认为，脐血移植所需NC及CD34+细胞理想值应分别达到3.7×107/kg和3×105/kg受者体重，故目前多用于儿童。因此体外扩增脐血定向祖细胞同时维持干细胞的数量和活性，加快短期造血重建，是脐血移植应用于较大儿童和成人所面临的关键问题，而造血细胞生长因子则是脐血体外扩增必不可少的因素。因此，近十余年来，探讨不同因子在脐血体外扩增中的作用，寻求其合理有效的组合及扩增时机等的研究备受关注，其研究成果也必将为脐血广泛应用于临床做出贡献。 　　1 脐血的生物学特性 　　11 造血干/祖细胞及表型标记与检测指标 　　通过对人和鼠类造血干/祖细胞的研究证明，造血干细胞没有特殊的形态学特征，它比中等大小圆形淋巴样单核细胞略小，比重较轻。99.5%以上处于Go期，祖细胞比重稍大，它们在流式细胞仪上表现在低前角光散射和低到中度垂直光散射。在人类尚无检测真正造血干细胞的方法，一般认为体外长期培养的起始细胞（LTCIC）或爆式集落形成单位（CFUBI）可代表干细胞的数量，而粒/红/巨噬/巨核细胞集落形成单位（CFUGEMM）则代表多能造血祖细胞。目前人类造血干细胞的较完整的标记应该为：CD34+，AC133+，CD117+，CD135+ ，CD38- ，CD33- ，CD90low ，CD71-，HLA-DR- ，mCD45RAlow ，Lin- ，RH123low，HD33342low 。而最近的研究已有充分证据证明在CD34+细胞之前存在着CD34-的造血干细胞。 　　12 脐血干/祖细胞生物学特性 　　在胚胞发育过程中，造血干细胞是从卵黄囊全能间叶细胞分化而来的，胚胞发育至3~5月时，造血主要发生在肝脏和脾脏中，因此其中含有大量的造血干细胞和祖细胞，虽然其中造血祖细胞的含量随胎龄的增大而减少，但足月新生儿脐血中的含量较正常骨髓高，且更幼稚些，脐血中CD34+细胞含量约1%~2%，研究还证实脐血中的造血干/祖细胞的增殖分化能力，体外集落形成能力，刺激后进入细胞周期的速度，自泌生长因子的能力较骨髓和外周血中强［3］；他们的端粒及端粒酶也长于和高于骨髓和外周血的干/祖细胞，且低表达或不表达细胞凋亡配基CD95/Fas，移植后寿命更长；脐血造血干/祖细胞对多种造血生长因子刺激的反应远强于骨髓及外周血的。因此，体外短期扩增便可获得大量造血细胞供成人移植。另一方面，脐血淋巴细胞和成人外周血淋巴细胞间存在许多量与质的差异。前者淋巴细胞数高于后者2~3倍，CD8+者比例低，其T细胞有未成熟的特性，缺乏T细胞活化/生长因子，抗原表达弱而不充分，自然杀伤（NK）细胞活性较多，对有丝分裂原PHA、CONA有较好的反应，但对异基因抗原的反应性差，这些免疫学特性有利于移植成功及成功后GVHD的发生率和程度均较骨髓和外周血干细胞移植者低。 　　2 造血细胞生长因子（HGFS）在脐血体外扩增中的作用 　　21 造血细胞生长因子（HGFS）的分类 　　HGFS是对造血干/祖细胞的增殖和分化直接或通过辅助细胞释放，其他细胞因子间接起调节作用的因子，根据其生物学活性，可分为4类：①作用于干细胞和早期祖细胞的生长因子：如干细胞刺激因子（SCF/CKit配体），Fit3配体（FL），基质成纤维细胞因子（bFGF）、白细胞介素6（IL6），IL11及白血病细胞抑制因子（LIF）。其中IL6是对造血及免疫有多种功能作用的细胞因子。②多系祖细胞刺激因子，如IL3及GMCSF等，它们主要刺激祖细胞的增殖与分化。③作用于晚期（单向）祖细胞的造血生长因子，如红细胞生成素（EPO），粒细胞刺激因子（GCSF），单核细胞系刺激因子（MCSF/Cfms 配体），IL5及血小板生成素（TPO）等，它们主要作用于单向造血祖细胞，供进一