超微归脾丸对D-半乳糖衰老模型小鼠抗衰老作用探究.docVIP

超微归脾丸对D-半乳糖衰老模型小鼠抗衰老作用探究 　 作者：桂卉，文雅萍，邹龙，刘东文，蔡光先 【摘要】 目的研究超微归脾丸的抗衰老作用及其机制。方法背部皮下注射D-半乳糖造衰老小鼠模型，造模同时连续灌胃给药45 d后，测定肝脏及脑组织的抗氧化指标(MDA，SOD，GSH-Px)，和胸腺、肝脾的脏器指数，并与普通归脾丸进行比较。结果超微归脾丸可显著提高衰老模型小鼠的胸腺、脾、肝的脏器指数;肝组织中MDA不同程度下降，SOD及GSH-Px活力不同程度提高，与普通归脾丸相比，差异具有显著性意义(Plt;0.05或Plt;0.01)。结论超微归脾丸的抗衰老作用优于普通归脾丸，其机制可能与提高免疫功能，清除氧自由基及抗脂质过氧化有关。 【关键词】 超微归脾丸; 抗衰老; 清除氧自由基; 抗脂质过氧化 衰老是一种自然的生物现象，主要表现为生物体全身各组织、器官的退行性变化，是诸多病理、生理过程综合作用的结果[1]。随着中国社会老龄化趋势的增强，抗衰老研究已成为热点，中医药以其独特的疗效，在抗衰老抗氧化的研究中占有日益重要的地位。归脾丸由黄芪、当归、白术、茯苓、酸枣仁等十多味中药配制而成，具有健脾益气、补血养心的功效，适用于食少体倦、健忘失眠、心悸及各种出血症，近年来的临床应用表明，该药还有一定的抗衰老、升白细胞等作用。本研究用皮下注射D-半乳糖造亚急性衰老小鼠模型，以小鼠的胸腺及肝脾脏器指数、肝及脑组织的抗氧化指标(MDA，SOD，GSH-Px)作为观察指标，对所制超微归脾丸的抗衰老作用及其机制进行了研究，并与普通归脾丸进行了比较，为超微归脾丸用于临床提供实验依据。现报道如下。 　　1 材料 　　1.1 动物健康小鼠60只，体质量18～20 g，由湖南中医药大学实验动物中心提供(合格证号：001978)。 　　1.2 试剂与仪器普通归脾丸、超微归脾丸(实验室自制)。丙二醛(MDA)测定试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)测试盒、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)测试盒(南京建成生物工程研究所，100t 批;无水乙醇(AR级);冰醋酸(长沙安泰精细化工实业有限公司，批。XHF-D内切式匀浆机(宁波新芝生物科技股份有限公司);UV-可见分光光度计(北京瑞利分析仪器公司，批号011224);50 μl，100 μl，1 000 μl移液枪(上海安亭微量进样器厂)。 　　2 方法 　　2.1 普通归脾丸的制备称取10倍处方量各药材饮片，加10倍量水浸泡30 min，加热回流煎煮1.5 h，离心过滤，滤渣加10倍量的水加热回流煎煮1.0 h，离心过滤，合并滤液，浓缩成浓缩液，浓缩液置蒸发皿中蒸干，置真空烘箱内60℃真空干燥，得干浸膏。干浸膏粉碎成100目浸膏粉，泛制成丸，干燥得普通归脾丸。 　　2.2 超微归脾丸的制备称取10倍处方量(除木香、白术、茯苓)各药材超微饮片，加10倍量的水，浸泡30 min，75℃下进行动态提取1.5 h，离心过滤，滤渣加8倍量的水，再提取1.0 h，离心过滤，合并滤液，浓缩成浓缩液，浓缩液置蒸发皿中蒸干，置真空烘箱内60℃真空干燥，得干浸膏;木香、白术经CO2超临界流体萃取得挥发油，挥发油用β-环糊精包合，得挥发油β-环糊精包合物，药渣与处方其它药物合并提取;干浸膏粉碎成100目浸膏粉，再与茯苓超微粉、挥发油包合物混匀泛制成丸，干燥得超微归脾丸。 　　2.3 动物分组取小鼠60只, 购于湖南中医药大学实验动物中心，体重18～20 kg，雌雄各半，用随机排列表法分为6组，分别为空白对照组，模型组，超微归脾丸低剂量、中剂量、高剂量组及普通归脾丸剂组(中剂量)。除了空白对照组外，其余5组均参照文献制备亚急性衰老小鼠模型[2]。 　　2.4 模型制备[2]模型组及给药组小鼠每只小鼠皮下注射300 mg·kg-1·d-1的3%D-半乳糖生理盐水溶液，1次/d，连续45 d。 　　2.5 给药方法将普通归脾丸、超微归脾丸均用蒸馏水溶解，配成相当于生药材1.0 g/ml的药液，超微归脾丸低、中、高剂量组均灌服超微归脾丸药液，普通归脾丸组灌服普通归脾丸药液。根据日服用剂量，按人体模型表面积换算后给药剂量分别为：超微归脾丸高剂量组15.50 g/ ( kg·d)、中剂量组8.00 g/ ( kg·d)、低剂量组3.89 g/ ( kg·d)，普通归脾丸组按超微归脾丸中剂量组给药，模型组、空白对照组给予中剂量同体积生理盐水。 　　2.6 指标测定连续给药45 d后，颈椎脱臼处死小鼠。取胸腺、脾、肝称重测定脏器指数;同时将肝及脑制成1%组织匀浆(组织匀浆的制备按试剂盒说明)，按试剂盒中方法测定肝及脑组织SOD的活力、MDA的含量、GSH-Px活性。 　　2.7 统计学分析数据均采用SPSS12.0软