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- 2017-09-13 发布于福建
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非放射性标记物BrdU探究进展
非放射性标记物BrdU探究进展
溴脱氧尿嘧啶核苷(bromodeoxyuridine ,BrdU)是DNA前体胸腺嘧啶核苷类似物,通过竞争掺入S期细胞单链
DNA核苷酸序列替代胸腺嘧啶。BrdU与胸腺嘧啶竞争掺入的强度可能与细胞增殖异常有关,如肝癌细胞约11.6%的胸腺嘧啶被替代,而正常肝细胞仅有1.1%[1]。既往在分子遗传学等研究中常采用同位素标记,但有放射污染,技术难度大,实验周期长等缺点。近年来非放射性标记物的研究发展迅速,然而其敏感性多数不及同位素,使实验应用受限。自82年Gratzer制备出抗BrdU单抗及标记检测技术不断改良提高,应用BrdU标记的敏感性已与氘胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)相似[2,3]。目前认为BrdU是最有希望取代同位素的非放射性标记物之一。本文综述近年来BrdU研究概况,重点介绍标记过程中有关技术问题。
一、标记技术:
1、剂量和途径:
BrdU可用于体内或体外标记,体内标记时,实验鼠按体重60mg-200mg/kg于鼠腹膜下注射[4,5],狗按体重100mg/kg静脉注射[6],人体以表面积150μg/m2用量,取标本前8.25-10h静脉注射[7],免疫组化检测。BrdU经静脉给药一般无副作用,偶有报道过量可致细胞突变。体外标记的研究广泛而深入,通常将保存在培养液中的新鲜组织剪啐至1-2mm3大小,离心去除了上清
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