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麋鹿角醇提液对衰老小鼠细胞因子影响 　【摘要】 目的观察麋鹿角醇提液对D-半乳糖(D-gal)诱导衰老模型小鼠细胞因子的影响。方法取ICR小鼠54只，雌雄兼用，随机分成4组：正常对照组(NG，n=12)，模型对照组(MG，n=14)，麋鹿角醇提液低剂量组(LG，2 g·kg-1·d-1，n=14)，麋鹿角醇提液高剂量组(HG，4 g·kg-1·d-1，n=14)。正常对照组给予背部皮下注射生理盐水，其余各组用D-半乳糖(D-gal)按120 mg·kg-1·d-1背部皮下注射6周，造成亚急性衰老模型。造模同时，麋鹿角醇提液低剂量组和高剂量组分别给予相应浓度的麋鹿角醇提液，正常对照组和模型对照组给予相同容积的0.5% 羧甲基纤维素钠(CMC)。采用ELISA法检测血清中细胞因子IL-2，IFN-γ的浓度，RT-PCR法检测脾淋巴细胞IL-2，IFN-γ mRNA的表达。结果模型组小鼠血清中IFN-γ浓度降低，IFN-γ基因表达水平下降。而麋鹿角醇提液能升高模型组小鼠血清中IL-2和IFN-γ的浓度，并增强模型小鼠脾淋巴细胞IL-2，IFN-γ mRNA的表达。结论麋鹿角醇提液能促进D-gal诱导的衰老模型小鼠细胞因子IL-2，IFN-γ的分泌与表达，增强其细胞免疫功能。 【关键词】 麋鹿角; 衰老模型; D-半乳糖; 细胞因子; 白介素2; γ干扰素 麋鹿角为鹿科动物麋鹿Elaphurus davidianus Milne-Edwards的骨化老角，又称麋角。据古代本草记载，麋鹿角具有“强筋骨、益血脉”，“补元脏、驻颜色”的功效[1,2]。由于多种原因导致麋鹿在我国已近绝灭，几乎无药可用。如今，人工繁殖技术的成功确保了药用资源和生态环境的协调发展，为麋鹿角恢复药用提供了来源[3]。目前，江苏大丰糜鹿保护区麋鹿已由1986年的39头繁殖到1300多头，并且野生放养自然繁殖成功，野生种群数达100多头，每年自然脱落下来的麋鹿角也越来越多，现已达3000多公斤，这为其开发研究提供了充足的物质基础。现代药理学研究发现麋鹿角的乙醇提取物具有耐疲劳、抗衰老的药理作用[4]。另外研究还发现麋鹿角醇提液对正常小鼠体液免疫、细胞免疫功能都有一定的促进作用[5]。但麋鹿角对于衰老小鼠细胞因子是否有影响未见文献报道。本实验使用D-半乳糖造成亚急性衰老模型，观察麋鹿角醇提液对衰老小鼠细胞因子的影响，旨在为麋鹿角的开发利用提供相关的科学依据，以尽快恢复麋鹿角的药用价值。 　　1 材料与仪器 　　1.1 动物ICR小鼠54只，体质量(18±2)g，雌雄兼用，由南通大学动物实验中心提供，合格证：SYXK(苏)2007-0021。 　　1.2 受试药物配制及试剂麋鹿角，由江苏大丰麋鹿保护区提供，将麋鹿角刨片、粉碎成约100目粉末，准确称取麋鹿角粉末200 g，加入70%乙醇溶液浸泡3次，48 h/次，合并浸泡液并过滤，然后减压蒸馏，浓缩至80 ml，即为麋鹿角乙醇提取浓缩液，浓度为2.5 g/ml。用0.5%羧甲基纤维素钠(CMC)溶液配制成所需浓度的麋鹿角醇提液备用。D-半乳糖为美国Amerisco公司产品，IL-2与IFN-γ的ELISA试剂盒为eBioscience公司产品。TRIZOL Reagent，加拿大BBI公司产品。DNA酶(DNase I)，Worthington公司原装。Oligo(dT)15，M-MLV逆转录酶，dATP,dTTP,dCTP,dGTP为Promega公司产品。Taq DNA polymerase为BBI公司产品，DL-2000 DNA Marker，TaKaRa公司产品。 　　1.3 仪器PTC-100 PCR仪，美国MJ.RESEARCH.INC产品;小源凝胶图像分析系统，上海小源科技有限公司产品;核酸蛋白分析仪，Eppendorf基因有限公司产品。 　　2 方法 　　2.1 分组与给药54只ICR小鼠，雌雄兼用，体质量(18±2)g，随机分成4组：正常对照组(NG，n=12)，模型对照组(MG，n=14)，麋鹿角醇提液低剂量组(LG，2 g/kg，n=14)，麋鹿角醇提液高剂量组(HG，4 g/kg，n=14)。正常对照组按0.1 ml/10g给予背部皮下注射生理盐水，其余各组用D-gal按120 mg/kg背部皮下注射6周，1次/d，造成亚急性衰老模型。造模同时，麋鹿角醇提液低剂量组灌胃生药剂量2 g/kg麋鹿角醇提液(0.2 g/ml麋鹿角醇提液，给药容积0.1 ml/10g)，高剂量组给予灌胃生药剂量4 g/kg麋鹿角醇提液(0.4 g/ml麋鹿角醇提液，给药容积0.1 ml/10g)，正常对照组和模型对照组给予相同容积的0.5% 羧甲基纤维素钠。 　　2.2 ELISA法检测血清中细胞因子IL-2，IFN-γ