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CXCR4及MMP9在喉鳞癌中表达及关系 　【关键词】 喉鳞癌；趋化因子受体（CXCR）4；基质金属蛋白酶（MMP）9；免疫组织化学 　　喉鳞癌的发生发展是多因素、多阶段的复杂过程，涉及多个基因和多种分子水平变化。趋化因子受体（CXCR）4具有广泛生物学效应，在多种恶性肿瘤的进展中发挥重要作用〔1〕。基质金属蛋白酶（MMP）9是MMP家族中的重要成员，能有效分解基底膜成分、明胶及Ⅳ型胶原蛋白细胞外基质（ECM）的重要成分。本实验应用免疫组织化学方法检测喉鳞癌组织CXCR4和MMP9的表达，探讨其关系及临床意义，旨在为研究喉鳞癌的发生发展中提供依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 一般资料 　　我院2006年1月至2007年12月喉鳞癌切除后存档的蜡块，共110例，年龄34～73（平均50.1±6.4）岁。其中男性71例，女性39例，其中高分化51例，中分化34例，低分化25例。临床资料均完整，患者术前未接受放化疗。收集50癌旁正常喉黏膜作为对照组。 　　1.2 试剂及方法 　　实验用的鼠抗人CXCR4和MMP9单克隆抗体均购自北京中彬金桥生物技术有限公司。应用免疫组化方法进行检测，具体步骤：脱蜡，水化组织切片，3%H2O2去离子水孵育10 min，以阻断内源性过氧化物酶；抗原修复后分别滴加一抗，室温37度孵育1～2 h或过夜，PBS冲洗，5 min×3次；滴加生物素标记的二抗，室温37度孵育20 min，PBS冲洗，5 min×3次；滴加辣根酶标记链霉卵白素，室温37度孵育20～30 min，PBS冲洗，5 min×3次；应用DAB显色剂显色；自来水充分冲洗、复染、脱水、透明、封片。操作过程中严格质控。 　　1.3 判定标准 　　结果均由两位病理主治医师共同阅片得出。CXCR4和MMP9阳性细胞可见细胞质呈棕黄色颗粒沉着，每张切片观察10个具有代表性的视野，根据细胞质的染色强度和染色细胞百分率进行评分。染色强度：基本不染色为0分，染色淡者为1分，染色深者为2分。染色百分率：随机选取10个高倍视野，计算每个视野中阳性细胞的百分率：lt;5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，gt;50%为3分。将每张切片的染色强度得分和染色细胞百分率得分相乘，为其最后得分。0～1分为阴性（），≥2分为阳性（+）。 　　1.4 统计学处理 　　应用SAS进行组间χ2检验。 　　2 结 果 　　2.1 CXCR4和MMP9在喉鳞癌与正常黏膜中的表达 　　在喉鳞癌中CXCR4和MMP9表达的阳性率明显高于正常黏膜（分别为68.18% vs 20.00%，χ2=32.045 6，Plt;0.000 1；71.82% vs 14.00%，χ2=46.225 5,Plt;0.000 1）。 　　2.2 喉鳞癌中CXCR4和MMP9在不同病理特征的表达 　　喉鳞癌CXCR4和MMP9蛋白的表达与肿物大小、分化程度及淋巴结转移有关（Plt;0.05），见表1。而与患者的年龄及性别等因素无相关性（Pgt;0.05）。表1 CXCR4和MMP9阳性表达与喉鳞癌临床病理特征的关系〔n（略）〕 　　2.3 喉鳞癌中CXCR4和MMP9表达的关系 　　将喉鳞癌中CXCR4和MMP9蛋白表达水平进行线性相关分析显示CXCR4和MMP9的表达呈正相关（r=0.412 5，P=0.010 2）。 　　　3 讨 论 肿瘤的生长与扩散是重要的生物学行为，而蔓延与远处转移是恶性肿瘤细胞和ECM成分共同参与的复杂而有序的过程，ECM降解及肿瘤细胞的移动是必不可少的过程。CXCR4是一种G蛋白耦联受体，CXCL12是目前已知唯一与CXCR4结合并激活的天然趋化因子，不仅参与机体内多种病理和生理过程，还可以引起肿瘤细胞内骨架蛋白的聚合与再分布，对调节细胞的运动和迁移有重要价值。肿瘤细胞基于趋化因子来实现器官特异性转移，其实质为高表达CXCR的肿瘤细胞向高表达相应趋化因子配体的器官进行特异性转移。有研究认为CXCR4可介导肌动蛋白多聚化和伪足形成，诱导肿瘤细胞的趋化、浸润及转移〔2〕。MMP9属于明胶酶（Ⅳ型胶原酶）类，可产生于正常组织细胞，以酶原形式分泌，当组织愈合、炎症时激活形成Ⅳ型胶原酶，在ECM的降解和再塑造中发挥作用〔3〕。 本实验显示CXCR4和MMP9表达具有正相关，提示二者在喉鳞癌中具有明显的协同作用，即CXCR4诱导MMP9的产生及分泌，促进ECM的降解，诱导肿瘤细胞向周围组织及周围淋巴结播散。有研究证实CXCR还可以诱导蛋白水解酶的释放，增强瘤细胞的侵袭能力〔4，5〕。喉鳞癌中CXCR4和MMP9的表达与肿瘤的大小、分化程度及有无淋巴结转移密切关，提示二者可能参与肿瘤的分化，同时又由于这些因素与患者的预后相关，因